| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-19页 |
| 研究背景 | 第11-19页 |
| 1 人eNOS基因的作用 | 第11-12页 |
| 2 人eNOS基因表达的信号调控机制 | 第12-13页 |
| 3 MAPK信号通路在人eNOS基因表达中的作用 | 第13-17页 |
| 4 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 5 实验设计思路与技术路线 | 第18-19页 |
| 材料与方法 | 第19-37页 |
| 1 细胞株、细菌和质粒 | 第19页 |
| 2 主要试剂与试剂盒 | 第19-20页 |
| 3 siRNA序列 | 第20页 |
| 4 常用试剂与配方 | 第20-26页 |
| ·TAE电泳缓冲液(50×) | 第20-21页 |
| ·LB液体培养基 | 第21页 |
| ·Ampicilin溶液(100 mg/mL) | 第21页 |
| ·LB平板 | 第21-22页 |
| ·CaCl2溶液(0.05 mol/L) | 第22页 |
| ·Solution Ⅰ | 第22页 |
| ·Solution Ⅱ | 第22页 |
| ·Solution Ⅲ | 第22页 |
| ·0.25%胰酶细胞消化液 | 第22-23页 |
| ·磷酸盐缓冲液(PBS)溶液成份 | 第23页 |
| ·DMEM培养基 | 第23页 |
| ·电泳缓冲液(10×) | 第23页 |
| ·转膜缓冲液 | 第23-24页 |
| ·10%十二烷基硫酸钠SDS溶液 | 第24页 |
| ·1.5mmol/LTris-HCL(pH 8.8) | 第24页 |
| ·0.5mmol/LTris-HCL(pH 6.8) | 第24页 |
| ·TBS缓冲液(tris bufferd saline,TBS 10×) | 第24页 |
| ·TBST缓冲液 | 第24页 |
| ·12%分离胶 | 第24-25页 |
| ·5%浓缩胶 | 第25页 |
| ·考马斯亮兰染色液 | 第25页 |
| ·脱色液 | 第25-26页 |
| 5 仪器设备 | 第26-27页 |
| 6 质粒提取 | 第27-30页 |
| ·氯化钙法制备感受态细胞 | 第27页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第27页 |
| ·挑单菌落 | 第27-28页 |
| ·质粒抽提 | 第28-29页 |
| ·电泳鉴定 | 第29-30页 |
| ·浓度测定 | 第30页 |
| 7 优化转染效率 | 第30-31页 |
| ·HUVEC-12细胞培养及处理方法 | 第30页 |
| ·荧光蛋白载体pDsRedl-1的表达分析 | 第30-31页 |
| 8 建立双荧光报告系统 | 第31-32页 |
| ·细胞转染 | 第31页 |
| ·双荧光报告系统检测各组细胞裂解液的荧光强度 | 第31-32页 |
| 9 抑制剂SB203580对eNOS基因启动子活性的影响 | 第32-34页 |
| ·Western Blot分析磷酸化p38蛋白和非磷酸化p38蛋白的表达 | 第32-34页 |
| ·双荧光报告系统检测各组细胞裂解液的荧光强度 | 第34页 |
| 10 siRNA干扰p38α后eNOS基因启动子活性的变化 | 第34-36页 |
| ·Western Blot检测不同浓度siRNA作用后p38蛋白的表达 | 第34-35页 |
| ·Western Blot检测siRNA作用不同时间后p38蛋白的表达 | 第35页 |
| ·Western Blot检测siRNA最佳浓度与时间点作用后p38蛋白的表达 | 第35页 |
| ·双荧光报告系统检测siRNA最佳浓度与时间点下各组细胞裂解液的荧光强度 | 第35-36页 |
| 11 统计学处理 | 第36-37页 |
| 结果 | 第37-46页 |
| 1 质粒的电泳鉴定 | 第37-38页 |
| 2 转染试剂用量的优化 | 第38页 |
| 3 p38α对人血管内皮细胞eNOS基因启动子活性的影响 | 第38-39页 |
| 4 抑制剂SB203580对磷酸化p38蛋白和非磷酸化p38蛋白的影响 | 第39-40页 |
| 5 抑制剂SB203580对eNOS基因启动子活性的影响 | 第40-41页 |
| 6 不同浓度siRNA对p38蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| 7 不同时间siRNA对p38蛋白表达的影响 | 第42-43页 |
| 8 最适浓度与时间点siRNA对p38蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 9 siRNA对eNOS基因启动子活性的影响 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-50页 |
| 小结与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 在学期间发表论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 英文缩略词表 | 第58页 |
