| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 1.真核生物基因调控方式 | 第10页 |
| 2.真核生物启动子的特点 | 第10-11页 |
| 3.人eNOS基因作用和启动子的结构特点与功能 | 第11-14页 |
| ·人eNOS基因的作用 | 第11页 |
| ·人eNOS基因启动子的结构特点与功能 | 第11-14页 |
| 4.人eNOS基因的结构改造及其转录活性的变化 | 第14-15页 |
| 5.研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 6.研究策略与技术路线 | 第16-17页 |
| 材料和方法 | 第17-31页 |
| 1.细菌、细胞与质粒 | 第17页 |
| 2.主要试剂和试剂盒 | 第17-18页 |
| 3.常用试剂和配方 | 第18-20页 |
| ·TAE电泳缓冲液(50×) | 第18页 |
| ·Ampicilin溶液(100mg/mL) | 第18页 |
| ·CaCl2溶液(0.05mol/L) | 第18页 |
| ·LB平板 | 第18-19页 |
| ·LB培养基 | 第19页 |
| ·0.5%胰酶细胞消化液 | 第19页 |
| ·Solution Ⅰ | 第19页 |
| ·Solution Ⅱ | 第19-20页 |
| ·Solution Ⅲ | 第20页 |
| ·磷酸盐缓冲液(PBS)溶液成份 | 第20页 |
| ·1640 培养基 | 第20页 |
| 4.仪器设备 | 第20-21页 |
| 5.人eNOS启动子改构体构建原理和步骤 | 第21-27页 |
| ·DNA定点突变的引物设计 | 第21-22页 |
| ·PCR | 第22-23页 |
| ·切胶回收与电泳鉴定 | 第23-24页 |
| ·PCR产物Blunting Kination反应 | 第24页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第24-25页 |
| ·质粒的提取与电泳鉴定 | 第25-26页 |
| ·酶切鉴定 | 第26页 |
| ·测序分析 | 第26-27页 |
| 6.HUVEC-12细胞的培养及处理 | 第27页 |
| 7.细胞转染及检测 | 第27-30页 |
| ·细胞转染分组和步骤 | 第27-29页 |
| ·启动子活性的检测 | 第29-30页 |
| 8.NO的检测 | 第30-31页 |
| ·样本的收集 | 第30页 |
| ·NO标准曲线的制作 | 第30页 |
| ·转染后细胞释放NO的测定 | 第30-31页 |
| 9.统计学处理 | 第31页 |
| 结果 | 第31-50页 |
| 1.人eNOS基因启动子改构体的构建 | 第31-33页 |
| 2.人eNOS基因启动子改构体的鉴定 | 第33-36页 |
| ·pGL2-eNOS-repSP3载体的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·人eNOS基因启动子改构体的测序鉴定 | 第34-36页 |
| 3.人eNOS基因启动子改构体的转录活性 | 第36-43页 |
| ·不同浓度氯化钴刺激下pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS启动子转录活性荧光比值 | 第36页 |
| ·不同浓度氯化钴刺激下pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS启动子转录活性的对比 | 第36-38页 |
| ·不同浓度氯化钴刺激下pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS-insSPl启动子转录活性的对比 | 第38-39页 |
| ·不同时间氯化钴刺激下pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS启动子转录活性荧光比值 | 第39-40页 |
| ·不同时间氯化钴刺激下pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS启动子转录活性的对比 | 第40-42页 |
| ·不同时间氯化钴刺激下pGL2-eNOS-repSP3和pGL2-eNOS-insSP #l启动子转录活性的对比 | 第42-43页 |
| 4.NO标准曲线绘制 | 第43-44页 |
| 5.氯化钴对转染eNOS基因改构体的HUVEC-12细胞释放NO的影响 | 第44-50页 |
| ·不同浓度氯化钴对不同改构体转染的HUVEC-12细胞释放NO的影响 | 第44-47页 |
| ·不同时间氯化钴对不同改构体转染的HUVEC-12细胞释放NO的影响 | 第47-50页 |
| 讨论 | 第50-55页 |
| 小结与展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 在校发表论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 英文缩略词表 | 第66页 |
