| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 1 绪论 | 第13-21页 |
| ·课题背景 | 第13页 |
| ·二色补血草的概况 | 第13-14页 |
| ·植物谷胱甘肽转移酶的存在 | 第14页 |
| ·植物谷胱甘肽转移酶的结构和分类 | 第14-15页 |
| ·植物谷胱甘肽转移酶的功能 | 第15-17页 |
| ·GST解除外界毒素以及内源有毒代谢物的侵害 | 第15-16页 |
| ·GST作为结合蛋白或配体 | 第16页 |
| ·保护组织免受伤害 | 第16页 |
| ·细胞的氧化还原稳态和调节细胞程序衰老 | 第16页 |
| ·GST作为胁迫信号蛋白 | 第16-17页 |
| ·催化异构化反应 | 第17页 |
| ·植物谷胱甘肽转移酶基因的表达 | 第17-18页 |
| ·GST基因表达的组织特异性 | 第17页 |
| ·GST基因表达的可诱导性 | 第17页 |
| ·GST基因表达对逆境的反应 | 第17-18页 |
| ·植物谷胱甘肽转移酶的研究现状 | 第18页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| ·本项研究的内容和技术路线 | 第19-21页 |
| ·研究的内容 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 2 二色补血草LbGST基因的序列分析及转录表达特性研究 | 第21-37页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·酶和试剂 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-29页 |
| ·LbGST基因的序列分析 | 第21-22页 |
| ·二色补血草的非生物胁迫处理 | 第22页 |
| ·总RNA的提取和质量检测 | 第22-23页 |
| ·总RNA反转录合成cDNA | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| ·荧光定位表达载体(pROKⅡ-LbGST-GFP)的构建 | 第25-28页 |
| ·LbGST基因的亚细胞定位 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-36页 |
| ·二色补血草GST基因的生物信息学分析 | 第29-32页 |
| ·LbGST基因在逆境胁迫下的表达特性分析 | 第32-34页 |
| ·pROK Ⅱ-LbGST-GFP表达载体的获得 | 第34-35页 |
| ·LbGST亚细胞定位结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 3 二色补血草LbGST基因的原核表达 | 第37-44页 |
| ·材料与方法 | 第37-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·酶和试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·原核表达载体pGEX-4T-2-LbGST的构建 | 第38-39页 |
| ·LbGST重组蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·pGEX-4T-2-LbGST重组质粒的获得 | 第40-41页 |
| ·pGEX-4T-2-LbGST的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 4 二色补血草LbGST基因的酵母转化及抗性分析 | 第44-57页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·菌株与载体 | 第44-45页 |
| ·主要化学试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-51页 |
| ·酵母表达载体pYES2-LbGST的构建 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pYES2-LbGST及载体pYES2的酵母遗传转化 | 第47-48页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第48页 |
| ·pYES2-LbGST重组质粒的诱导表达 | 第48-50页 |
| ·重组酵母INVSc1(pYES2-LbGST)的逆境胁迫试验 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·酵母重组表达载体(pYES2-LbGST)的获得 | 第51-52页 |
| ·pYES2-LbGST转酵母INVScl PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·LbGST在酵母中的表达 | 第53-54页 |
| ·重组酵母INVSc1(pYES2-LbGST)抗逆性实验 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 5 二色补血草LbGST基因的烟草转化及抗性分析 | 第57-78页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·菌株与载体 | 第57-58页 |
| ·主要化学试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器设备 | 第58页 |
| ·功能验证试剂 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-65页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·农杆菌感受态的制备及电击转化 | 第60-61页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第61页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第61-62页 |
| ·转化烟草的Northern杂交 | 第62页 |
| ·转基因烟草植株的抗性分析 | 第62-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-75页 |
| ·植物表达载体(pROKⅡ-LbGST)的获得 | 第65-66页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第66-67页 |
| ·转LbGST基因烟草植株的分子鉴定 | 第67-68页 |
| ·转基因烟草植株的耐盐性分析 | 第68-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附录 | 第88-89页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
