| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| CHAPTER I INTRODUCTION | 第16-41页 |
| 1.1 RECEPTOR-LIGAND INTERACTION | 第16-17页 |
| 1.2 TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION OF IFNS | 第17-18页 |
| 1.3 INTERFERONS | 第18-25页 |
| 1.3.1 Type-I Interferons | 第19-22页 |
| 1.3.2 Type-II interferons | 第22-23页 |
| 1.3.3 Type-III Interferons | 第23-25页 |
| 1.4 MEDIATION OF IFN SIGNALING | 第25-27页 |
| 1.4.1 First Level Signaling Pathway | 第25-26页 |
| 1.4.2 Second Level Signaling Pathways | 第26页 |
| 1.4.3 Third Level of Signaling Pathways | 第26-27页 |
| 1.5 SIGNAL TRANSDUCTION | 第27-28页 |
| 1.6 MOLECULAR ACTIONS OF IFNS | 第28-32页 |
| 1.6.1 Myxovirus resistance proteins | 第28-29页 |
| 1.6.2 Protein Kinase R | 第29页 |
| 1.6.3 2′-5′-oligoadenylate synthetase | 第29-30页 |
| 1.6.4 IFN-inducible transmembrane proteins (IFITM) | 第30页 |
| 1.6.5 Viperin | 第30-31页 |
| 1.6.6 CCCH-Type Zinc Finger Antiviral Protein (ZAP) | 第31-32页 |
| 1.7 BACULOVIRUS EXPRESSION VECTOR SYSTEM (BEVS) | 第32-39页 |
| 1.7.1 Baculovirus | 第32页 |
| 1.7.2 Baculovirus promoter | 第32-33页 |
| 1.7.3 Baculovirus expression vector system (BEVS) | 第33-34页 |
| 1.7.4 Construction of recombinant baculovirus | 第34-36页 |
| 1.7.5 Application of BEVS | 第36-39页 |
| 1.7.5.1 Expression of recombinant proteins by employing BEVS | 第36-37页 |
| 1.7.5.2 Baculovirus surface display technology | 第37-38页 |
| 1.7.5.3 BEVS in gene therapy | 第38-39页 |
| 1.8 RESEARCH PURPOSES AND SIGNIFICANCE | 第39-41页 |
| 1.8.1 Research objective | 第39页 |
| 1.8.2 Research significance | 第39-41页 |
| CHAPTER II EXPRESSION OF RECOMBINANT CHICKEN INTERFERON LAMBDA(RCHIFN-Λ) IN BACULOVIRUS EXPRESSION VECTOR SYSTEM | 第41-67页 |
| 2.1 INTRODUCTION | 第41页 |
| 2.2 MATERIALS AND METHODS | 第41-45页 |
| 2.2.1 Experimental materials and reagents | 第41-42页 |
| 2.2.2 Instruments | 第42页 |
| 2.2.3 Common reagent configuration methods | 第42-45页 |
| 2.2.3.1 Media preparation for E. coli | 第42-43页 |
| 2.2.3.2 Reagents for plasmid extraction | 第43页 |
| 2.2.3.3 DNA fragment recovery reagent | 第43页 |
| 2.2.3.4 Nucleic Acid and Protein Electrophoresis Buffer | 第43-44页 |
| 2.2.3.5 Cell culture medium | 第44-45页 |
| 2.3 EXPERIMENTAL METHODS | 第45-57页 |
| 2.3.1 Data mining and Bioinformatics Analysis of Chicken IFN-lambda (ch IFN-λ) | 第45-46页 |
| 2.3.2 Construction of baculovirus expression vector | 第46-53页 |
| 2.3.2.1 Plasmid extraction of p UC-ch IFN-λ | 第46-47页 |
| 2.3.2.2 Separation of ch IFN-λ fragments | 第47-48页 |
| 2.3.2.3 Preparation of competent cells | 第48页 |
| 2.3.2.4 Construction of recombinant plasmid p VL-ch IFN-λ | 第48-50页 |
| 2.3.2.6 ch IFN-λ gene is linked downstream of the pph promoter | 第50-52页 |
| 2.3.2.7 Preparation of recombinant baculovirus and expression of ch IFN-λ in silkworm | 第52-53页 |
| 2.3.2.7.1 Revival and passage of Bm5 cells | 第52页 |
| 2.3.2.7.2 Co-transfection | 第52页 |
| 2.3.2.7.3 Infection of the recombinant virus to silkworm | 第52-53页 |
| 2.3.3 Preparation of chicken embryo fibroblasts (CEF) | 第53-55页 |
| 2.3.4 Screening, purification, and amplification of recombinant viruses | 第55-56页 |
| 2.3.5 Preliminary purification of ch IFN-λ expressed by the silkworm | 第56-57页 |
| 2.4 RESULTS AND ANALYSIS | 第57-63页 |
| 2.4.1 Analysis and optimization of ch IFN-λ | 第57-59页 |
| 2.4.2 Restriction of the target gene fragment Ch IFN- λ | 第59-60页 |
| 2.4.3 Detection of antiviral activity of ch IFN-λ in silkworm | 第60-62页 |
| 2.4.4 Screening and purification of recombinant virus | 第62-63页 |
| 2.5 DISCUSSION | 第63-67页 |
| CHAPTER III CHARACTERIZATION OF CHICKEN INTERFERON LAMBDA IN PRIMARY FIBROBLASTS AND BROILER CHICKEN | 第67-103页 |
| 3.1 INTRODUCTION | 第67页 |
| 3.2 EXPERIMENTAL MATERIALS AND INSTRUMENTS | 第67-68页 |
| 3.2.1 Materials and reagents | 第67页 |
| 3.2.2 Instruments | 第67-68页 |
| 3.2.3 Common reagent configuration method | 第68页 |
| 3.3 EXPERIMENTAL METHODOLOGY | 第68-74页 |
| 3.3.1 Preparation of chicken embryo fibroblasts (CEF) | 第68-69页 |
| 3.3.2 ch IFN-λ treatment to the CEF | 第69页 |
| 3.3.3 Egg Inoculation | 第69页 |
| 3.3.4 Washing of RBCs | 第69-70页 |
| 3.3.5 Hemagglutination test (HA) | 第70页 |
| 3.3.6 Introduction of NDV to cells | 第70-71页 |
| 3.3.7 Antiviral potential of Chicken Interferon Lambda against NDV | 第71-72页 |
| 3.3.8 Birds and Management | 第72页 |
| 3.3.9 Sample collection | 第72页 |
| 3.3.10 Total RNA Extraction and Sequencing | 第72页 |
| 3.3.11 RNA Extraction Protocol from Tissue Samples | 第72-73页 |
| 3.3.12 RNA-Seq Quality | 第73-74页 |
| 3.3.13 Gene Ontology (GO) and KEGG Enrichment Analysis | 第74页 |
| 3.4 RESULT AND ANALYSIS | 第74-98页 |
| 3.4.1 Dynamics of weight gain post ch IFN-λ treatment | 第74-75页 |
| 3.4.2 Characterization of ch IFN-λ-induced Gene Expression in Chicken | 第75-81页 |
| 3.4.3 Confirmation of DEGs by q PCR | 第81页 |
| 3.4.4 Upregulation of crucial genes in response to ch IFN-λ treatment | 第81-83页 |
| 3.4.5 Functional Analysis of DEGs | 第83-88页 |
| 3.4.6 KEGG Pathway Enrichment | 第88-98页 |
| 3.5 DISCUSSION | 第98-103页 |
| CHAPTER IV CONCLUSION | 第103-104页 |
| REFERENCES | 第104-113页 |
| APPENDIX | 第113-115页 |
| CODON OPTIMIZED SEQUENCE OF CHIFN-LAMBDA3 | 第113页 |
| SEQUENCES FOR PROTEIN MODELING OF CHICKEN INTERFERONS | 第113-115页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第115-117页 |
| CURRICULUM VITAE | 第117-120页 |
| PUBLICATION FROM DOCTORAL THESIS | 第120页 |
