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高产乳酸乙酯酿酒酵母菌株构建

摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
1 前言第9-21页
    1.1 白酒工业概况第9页
    1.2 白酒中风味物质概况第9-12页
        1.2.1 高级醇第10页
        1.2.2 酸类第10-11页
        1.2.3 酯类第11-12页
        1.2.4 其他物质第12页
    1.3 白酒中乳酸乙酯合成调控方法第12-14页
    1.4 南极假丝酵母脂肪酶B合成乳酸乙酯的研究进展第14页
    1.5 rDNA介导的多拷贝表达研究进展第14-17页
        1.5.1 酿酒酵母rDNA组成元件及功能第14-16页
        1.5.2 rDNA多拷贝整合的应用第16-17页
    1.6 表面展示表达研究进展第17-19页
        1.6.1 表面展示简介第17页
        1.6.2 α型凝集素和a型凝集素系统介绍第17-19页
        1.6.3 表面展示应用第19页
    1.7 本课题的立题依据及研究内容第19-21页
        1.7.1 本课题立题依据第19-20页
        1.7.2 本课题主要研究内容第20-21页
2 材料与方法第21-40页
    2.1 材料与仪器第21-25页
        2.1.1 菌种与质粒第21-22页
        2.1.2 主要实验仪器第22页
        2.1.3 主要试剂第22-23页
        2.1.4 主要培养基第23-24页
        2.1.5 主要溶液第24-25页
    2.2 实验方法第25-37页
        2.2.1 引物设计第25-28页
        2.2.2 目的片段的获取及纯化第28-31页
        2.2.3 重组质粒的构建第31-33页
        2.2.4 酵母转化第33-34页
        2.2.5 Real-time PCR第34-37页
        2.2.6 生长性能的测定第37页
        2.2.7 清香型白酒半固态发酵实验第37页
        2.2.8 KanMx筛选标记的去除第37页
    2.3 分析方法第37-40页
        2.3.1 CO_2排放量的测定第37-38页
        2.3.2 酒精度的测定第38页
        2.3.3 还原糖的测定第38页
        2.3.4 高级醇及乳酸乙酯测定第38-39页
        2.3.5 数据分析第39-40页
3 结果与讨论第40-70页
    3.1 rDNA多拷贝整合表达南极假丝酵母脂肪酶B基因对酿酒酵母乳酸乙酯生成量的影响第40-50页
        3.1.1 rDNA多拷贝整合质粒Yip-rPCk的构建第40-45页
        3.1.2 rDNA多拷贝整合菌株的构建第45-47页
        3.1.3 rDNA多拷贝菌株与亲本菌株发酵实验第47-50页
        3.1.4 小结第50页
    3.2 a型凝集素的表面展示表达南极假丝酵母脂肪酶B对酿酒酵母乳酸乙酯生成量的影响第50-62页
        3.2.1 a型凝集素表达盒载体pYCD构建第50-52页
        3.2.2 a型凝集素表面展示载体pYCPK构建第52-54页
        3.2.3 含有a型凝集素AGA1基因的α型酿酒酵母菌株构建第54-57页
        3.2.4 a型凝集素表面展示菌株构建第57-58页
        3.2.5 a型凝集素的表面展示菌株与亲本菌株的发酵实验第58-61页
        3.2.6 小结第61-62页
    3.3 a型凝集素表面展示南极假丝酵母脂肪酶B基因对酿酒酵母乳酸乙酯生成量的影响第62-70页
        3.3.1 α型凝集素的表面展示载体Yep-PCAK构建第62-65页
        3.3.2 α型凝集素表面展示菌株构建第65-66页
        3.3.3 α型凝集素表面展示菌株与亲本菌株发酵实验第66-69页
        3.3.4 小结第69-70页
4 结论第70-71页
    4.1 全文结论第70页
    4.2 论文创新点第70-71页
5 展望第71-72页
6 参考文献第72-78页
7 攻读学位期间发表的论文、专利及获奖第78-79页
8 致谢第79页

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