| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 研究背景和意义 | 第8-13页 |
| 1.1.1 内皮祖细胞的研究现状 | 第8-10页 |
| 1.1.2 CXCL12的研究现状 | 第10-12页 |
| 1.1.3 本课题的研究目的和意义 | 第12-13页 |
| 1.2 研究的主要内容和技术路线 | 第13-14页 |
| 第二章 EPC的分离培养和鉴定 | 第14-22页 |
| 2.1 引言 | 第14页 |
| 2.2 实验仪器和材料 | 第14-16页 |
| 2.2.1 实验仪器和材料 | 第14-15页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.2.3 液体配制 | 第16页 |
| 2.3 实验方法 | 第16-19页 |
| 2.3.1 EPC分离方法 | 第16-17页 |
| 2.3.2 EPC的培养 | 第17-18页 |
| 2.3.3 流式分析鉴定EPC | 第18-19页 |
| 2.4 实验结果 | 第19-20页 |
| 2.4.1 EPC的体外培养情况 | 第19-20页 |
| 2.4.2 EPC的流式鉴定结果 | 第20页 |
| 2.5 讨论 | 第20-21页 |
| 2.6 本章小结 | 第21-22页 |
| 第三章 慢病毒的包装和转染效率鉴定 | 第22-47页 |
| 3.1 引言 | 第22-24页 |
| 3.2 实验仪器和材料 | 第24-25页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第24页 |
| 3.2.2 液体配制 | 第24-25页 |
| 3.3 实验方法 | 第25-37页 |
| 3.3.1 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 3.3.2 pLV-CXCL12质粒的构建 | 第26-30页 |
| 3.3.3 pLV-CXCL12二聚体和单体质粒的构建 | 第30-31页 |
| 3.3.4 质粒大量抽提 | 第31-32页 |
| 3.3.5 293T细胞的培养 | 第32-33页 |
| 3.3.6 慢病毒的包装和收集 | 第33-35页 |
| 3.3.7 慢病毒的纯化 | 第35页 |
| 3.3.8 慢病毒的滴度测定 | 第35-36页 |
| 3.3.9 慢病毒转染EPC | 第36页 |
| 3.3.10 流式细胞分析鉴定病毒转染效率 | 第36-37页 |
| 3.4 实验结果 | 第37-44页 |
| 3.4.1 体外成功构建pLV-CXCL12质粒 | 第37-40页 |
| 3.4.2 体外成功构建pLV-dCXCL12,pLV-mCXCL12载体 | 第40-42页 |
| 3.4.3 慢病毒包装纯化 | 第42页 |
| 3.4.4 慢病毒可成功转染EPC | 第42-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-46页 |
| 3.6 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 CXCL12单体基因修饰可有效促进EPC增殖、迁移、成管功能 | 第47-76页 |
| 4.1 引言 | 第47-48页 |
| 4.2 实验仪器和材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.2.2 液体配制 | 第48-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-61页 |
| 4.3.1 实验细胞的准备 | 第49-50页 |
| 4.3.2 EPC增殖功能的测定 | 第50-51页 |
| 4.3.3 EPC迁移功能的测定 | 第51-52页 |
| 4.3.4 EPC成管功能的测定 | 第52-53页 |
| 4.3.5 细胞中mRNA的提取 | 第53-54页 |
| 4.3.6 Real-time PCR检测CXCL12mRNA的表达 | 第54-55页 |
| 4.3.7 Real-time PCR检测EPC中生长因子和受体的表达 | 第55-56页 |
| 4.3.8 细胞中蛋白的提取 | 第56-57页 |
| 4.3.9 Western blot测定EPC中生长因子及受体蛋白表达 | 第57-59页 |
| 4.3.10 Conditioned medium培养人脐静脉内皮细胞,增殖、迁移、成管能力测定 | 第59页 |
| 4.3.11 AMD3100和siCXCR7阻断信号通路 | 第59-61页 |
| 4.3.12 信号通路阻断后EPC增殖、迁移、成管功能测定 | 第61页 |
| 4.3.13 EPC中其他下游信号通路的表达情况 | 第61页 |
| 4.4 实验结果 | 第61-71页 |
| 4.4.1 基因修饰的EPC中CXCL12基因表达情况 | 第61-62页 |
| 4.4.2 mCXCL12-EPC增殖、迁移和成管能力更强 | 第62-65页 |
| 4.4.3 mCXCL12-EPC中VEGF表达升高 | 第65页 |
| 4.4.4 mCXCL12-EPC的conditionedmedium处理显著增强HUVEC的增殖能力 | 第65页 |
| 4.4.5 mCXCL12-EPC中CXCR4、CXCR7表达升高 | 第65-67页 |
| 4.4.6 CXCL12基因修饰的EPC中AKT,ERK,P38信号通路均被激活 | 第67-68页 |
| 4.4.7 阻断信号通路显著降低m CXCL12-EPC迁移能力 | 第68-71页 |
| 4.5 讨论 | 第71-74页 |
| 4.6 本章小结 | 第74-76页 |
| 第五章 结束语 | 第76-77页 |
| 5.1 全文总结 | 第76页 |
| 5.2 研究展望 | 第76-77页 |
| 中英文缩写词表 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第92-94页 |
