| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第10-18页 |
| 1.1 链霉菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 链霉菌简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 链霉菌在药物研发中的地位 | 第11-12页 |
| 1.2 格尔德霉素 | 第12-15页 |
| 1.2.1 格尔德霉素的作用机理 | 第12-14页 |
| 1.2.2 格尔德霉素的生物合成 | 第14-15页 |
| 1.3 MarR家族调控蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 材料及方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料和培养条件 | 第18-19页 |
| 2.2 引物 | 第19页 |
| 2.3 常用的化学试剂 | 第19页 |
| 2.4 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.5 orf17基因敲除突变株的互补分析 | 第20-23页 |
| 2.5.1 互补质粒的构建 | 第20-22页 |
| 2.5.1.1 基因组DNA的提取 | 第20页 |
| 2.5.1.2 聚合酶链式反应(PCR)扩增 | 第20-21页 |
| 2.5.1.3 质粒提取 | 第21页 |
| 2.5.1.4 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第21页 |
| 2.5.1.5 DNA纯化方法 | 第21页 |
| 2.5.1.6 载体与目的DNA的连接反应 | 第21-22页 |
| 2.5.1.7 感受态细胞的制备及转化 | 第22页 |
| 2.5.2 接合转移 | 第22-23页 |
| 2.6 发酵及产物分析 | 第23-24页 |
| 2.6.1 自溶链霉菌的发酵 | 第23页 |
| 2.6.2 发酵产物的提取 | 第23页 |
| 2.6.3 发酵产物的分析 | 第23-24页 |
| 2.7 RT-PCR | 第24-27页 |
| 2.7.1 总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.7.2 cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.7.3 反转录PCR | 第26页 |
| 2.7.4 Real-time PCR | 第26-27页 |
| 2.8 Orf17蛋白表达及EMSA分析 | 第27-34页 |
| 2.8.1 表达质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.8.2 Orf17蛋白的表达与纯化 | 第29-30页 |
| 2.8.2.1 Orf17蛋白表达 | 第29-30页 |
| 2.8.2.2 Orf17蛋白的纯化 | 第30页 |
| 2.8.3 凝胶迁移试验(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA) | 第30-34页 |
| 2.8.3.1 生物素标记EMSA探针 | 第30-31页 |
| 2.8.3.2 化学发光法检测EMSA探针 | 第31-34页 |
| 第三章 结果 | 第34-50页 |
| 3.1 orf17基因在格尔德霉素生物合成中的作用 | 第34-40页 |
| 3.2 格尔德霉素生物合成相关基因在orf17突变株中的表达 | 第40-44页 |
| 3.2.1 RT-PCR分析格尔德霉素生物合成相关基因的转录表达 | 第40-42页 |
| 3.2.2 Real-time PCR分析相关调控基因的转录表达 | 第42-44页 |
| 3.3 Orf17蛋白表达及EMSA分析其与可能靶目标的结合 | 第44-50页 |
| 3.3.1 表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 蛋白的表达与纯化 | 第45-47页 |
| 3.3.3 EMSA分析Orf17蛋白与其可能靶目标的结合 | 第47-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 总结与展望 | 第52-54页 |
| 附录一 溶液、缓冲液及培养基 | 第54-59页 |
| 附录二 引物 | 第59-62页 |
| 附录三 实验仪器 | 第62-64页 |
| 附录四 序列(测序结果) | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
