| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-37页 |
| ·纤维素的结构 | 第16-17页 |
| ·降解纤维素的微生物 | 第17-19页 |
| ·真菌 | 第18页 |
| ·细菌 | 第18-19页 |
| ·未培养微生物 | 第19页 |
| ·微生物降解纤维素的策略 | 第19-27页 |
| ·非复合体纤维素酶系 | 第19-21页 |
| ·复合体纤维素酶系 | 第21-23页 |
| ·细胞结合型非复合体纤维素降解酶系 | 第23-26页 |
| ·其他纤维素降解策略 | 第26-27页 |
| ·Cytophaga hutchinsonii研究背景 | 第27-35页 |
| ·基因组信息预测 | 第28-34页 |
| ·C. hutchinsonii研究进展 | 第34-35页 |
| ·展望 | 第35页 |
| ·论文的立题依据及工作内容 | 第35-37页 |
| 第二章 Cytophaga hutchinsonii对不同碳源的代谢利用 | 第37-53页 |
| ·材料与方法 | 第37-43页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·再生无定形纤维素(RAC)制备 | 第38页 |
| ·纤维寡糖制备与纯化 | 第38-41页 |
| ·接种与培养 | 第41页 |
| ·生长曲线与底物消耗测定 | 第41-42页 |
| ·休止细胞水解纤维素和纤维寡糖产物分析 | 第42页 |
| ·酚硫酸法测定总糖 | 第42页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)检测寡糖 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·纤维寡糖制备 | 第43-45页 |
| ·不同碳源生长曲线与底物消耗测定 | 第45-48页 |
| ·休止细胞水解纤维素和纤维寡糖产物分析 | 第48-51页 |
| ·小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 荧光辅助糖电泳技术(FACE)的建立及其应用 | 第53-62页 |
| ·材料与方法 | 第53-55页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第53页 |
| ·糖还原端ANTS标记 | 第53-54页 |
| ·电泳 | 第54页 |
| ·分离胶浓度探索 | 第54页 |
| ·ANTS标记温度稳定性测定 | 第54-55页 |
| ·ANTS标记荧光扫描 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-61页 |
| ·分离胶浓度的确定 | 第55页 |
| ·寡糖的FACE检测 | 第55-57页 |
| ·ANTS标记温度稳定性测定 | 第57页 |
| ·ANTS标记荧光扫描 | 第57-58页 |
| ·ANTS标记纤维素 | 第58-59页 |
| ·FACE技术在Cytophaga hutchinsonii降解纤维素机理研究中的应用 | 第59-61页 |
| ·小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第四章 Cytophaga hutchinsonii膜相关蛋白提取及性质研究 | 第62-76页 |
| ·材料与方法 | 第62-66页 |
| ·菌株 | 第62页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62-63页 |
| ·细胞分级分离 | 第63-64页 |
| ·膜蛋白的提取 | 第64页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第64页 |
| ·纤维素酶活测定 | 第64页 |
| ·蛋白纯度及分子量分析 | 第64页 |
| ·细胞膜纤维素酶活性染色 | 第64-65页 |
| ·膜蛋白对结晶纤维素和纤维寡糖的降解能力分析 | 第65页 |
| ·外膜蛋白复合物分析 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·细胞各组分蛋白成分与活性分析 | 第66-68页 |
| ·不同去垢剂对膜蛋白的溶解效果 | 第68-69页 |
| ·不同碳源培养菌体细胞膜蛋白比较 | 第69-70页 |
| ·细胞膜蛋白活性染色 | 第70-72页 |
| ·膜蛋白对结晶纤维素和纤维寡糖的降解 | 第72-73页 |
| ·外膜蛋白复合物的Blue Native-PAGE分析 | 第73页 |
| ·小结与讨论 | 第73-76页 |
| 第五章 Cytophaga hutchinsonii细胞膜纤维素酶的分离纯化及性质研究 | 第76-106页 |
| ·材料与方法 | 第76-81页 |
| ·菌株 | 第76页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76-77页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第77页 |
| ·纤维素酶活测定 | 第77页 |
| ·蛋白纯度及分子量分析 | 第77页 |
| ·蛋白质银染 | 第77页 |
| ·细胞膜纤维素酶活性染色 | 第77页 |
| ·细胞外膜羧甲基纤维素酶(CMCase)的分离纯化 | 第77-78页 |
| ·细胞质膜纤维二糖酶(Cellobiase)的分离纯化 | 第78-79页 |
| ·蛋白质的MALDI-TOF鉴定与跨膜结构域分析 | 第79-80页 |
| ·纯化纤维素酶的酶学性质分析 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-105页 |
| ·细胞外膜羧甲基纤维素酶(CMCase)的分离纯化 | 第81-88页 |
| ·细胞质膜纤维二糖酶(Cellobiase)的分离纯化 | 第88-90页 |
| ·纯化纤维素酶的MALDI-TOF鉴定 | 第90-98页 |
| ·纯化纤维素酶的跨膜结构分析 | 第98-100页 |
| ·纯化纤维素酶的反应最适pH和温度 | 第100-101页 |
| ·纯化纤维素酶的底物特异性 | 第101-102页 |
| ·纯化纤维素酶对纤维寡糖水解产物的分析 | 第102-103页 |
| ·去垢剂对纤维素酶CHU_1107活性的影响 | 第103-104页 |
| ·纤维素酶CHU_1107对结晶纤维素的吸附 | 第104-105页 |
| ·小结与讨论 | 第105-106页 |
| 第六章 Cytophaga hutchinsonii纤维素酶异源表达与性质研究 | 第106-140页 |
| ·材料与方法 | 第106-115页 |
| ·菌株与质粒 | 第106-107页 |
| ·引物 | 第107-109页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第109-110页 |
| ·培养基 | 第110页 |
| ·常规分子生物学方法 | 第110-112页 |
| ·Western blotting检测重组蛋白的表达 | 第112页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第112页 |
| ·重组蛋白生化性质测定 | 第112-114页 |
| ·生物信息学分析 | 第114-115页 |
| ·氨基酸定点突变 | 第115页 |
| ·结果与分析 | 第115-137页 |
| ·纤维素酶的表达纯化 | 第115-120页 |
| ·CHU_1107催化结构域(GH5)的生化特性 | 第120-127页 |
| ·CHU_1075催化结构域(GH8)的生化特性 | 第127页 |
| ·第五家族糖苷水解酶系统发生分析 | 第127-130页 |
| ·CHU_1107同源模建与关键氨基酸分析 | 第130-135页 |
| ·关键氨基酸定点突变 | 第135-137页 |
| ·小结与讨论 | 第137-140页 |
| 第七章 Cytophaga hutchinsonii遗传操作体系的建立及相关纤维素酶突变体的构建分析 | 第140-160页 |
| ·材料与方法 | 第140-145页 |
| ·菌株与质粒 | 第140-141页 |
| ·引物 | 第141-142页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第142-143页 |
| ·培养基 | 第143页 |
| ·常规分子生物学方法 | 第143页 |
| ·接合 | 第143-144页 |
| ·电转化 | 第144页 |
| ·突变株鉴定 | 第144页 |
| ·启动子分析 | 第144页 |
| ·突变株表型测定 | 第144-145页 |
| ·结果与分析 | 第145-158页 |
| ·pHimarEm1转座子随机突变与突变株筛选 | 第145-148页 |
| ·pHimarEm1转座子介导的GFP蛋白表达 | 第148-153页 |
| ·CHU_1107插入失活突变株的性能分析 | 第153-158页 |
| ·小结与讨论 | 第158-160页 |
| 全文总结 | 第160-164页 |
| 参考文献 | 第164-179页 |
| 致谢 | 第179-181页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第181-182页 |
| 附录 | 第182-188页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第188页 |
