摘要 | 第3-5页 |
abstract | 第5-7页 |
常用英文缩略词表 | 第8-12页 |
1 前言 | 第12-23页 |
1.1 跳蚤过敏性皮炎简介 | 第12页 |
1.2 跳蚤 | 第12-16页 |
1.2.1 跳蚤的危害 | 第13-14页 |
1.2.2 跳蚤的防治 | 第14-16页 |
1.3 超敏反应及其类型 | 第16-20页 |
1.3.1 超敏反应 | 第16页 |
1.3.2 I型超敏反应 | 第16-18页 |
1.3.3 II型超敏反应 | 第18页 |
1.3.4 III型超敏反应 | 第18-19页 |
1.3.5 Ⅳ型超敏反应 | 第19-20页 |
1.4 过敏性皮炎 | 第20-22页 |
1.5 动物模型 | 第22-23页 |
1.5.1 动物模型 | 第22页 |
1.5.2 动物模型类型及设计原则 | 第22-23页 |
1.5.3 过敏性皮炎动物模型 | 第23页 |
2 材料与方法 | 第23-38页 |
2.1 主要仪器与试剂 | 第23-25页 |
2.1.1 主要仪器设备 | 第23-24页 |
2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
2.1.3 实验室试剂配置 | 第24-25页 |
2.1.4 实验动物与跳蚤 | 第25页 |
2.2 方法 | 第25-38页 |
2.2.1 FSA1基因与引物的设计合成 | 第25-26页 |
2.2.2 PCR扩增FSA1基因片段 | 第26页 |
2.2.3 FSA1基因和载体pET28a、p VAX1的双酶切 | 第26-27页 |
2.2.4 FSA1基因片段和克隆载体的连接 | 第27页 |
2.2.5 重组质粒的转化 | 第27-28页 |
2.2.6 重组质粒的鉴定 | 第28页 |
2.2.7 RT-PCR鉴定pVAX-FSAl在真核细胞中的表达 | 第28-30页 |
2.2.8 pET28a-FSA1在大肠杆菌中诱导表达的条件优化 | 第30-31页 |
2.2.9 目的蛋白rFSA1的诱导表达 | 第31页 |
2.2.10 目的蛋白rFSA1的纯化 | 第31-32页 |
2.2.11 目的蛋白rFSA1的浓缩与复性 | 第32页 |
2.2.12 rFSA1蛋白的SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
2.2.13 rFSA1蛋白的Western Blot鉴定 | 第33-34页 |
2.2.14 真核表达质粒pVAX1-FSA1的大量提取 | 第34页 |
2.2.15 宠物皮炎疫苗的准备 | 第34-35页 |
2.2.16 建立猫过敏性皮炎模型及评分标准 | 第35页 |
2.2.17 免疫效力评价 | 第35-36页 |
2.2.18 外周血嗜酸性粒细胞的检测 | 第36页 |
2.2.19 MTT法检测猫外周血T细胞增殖活性 | 第36-37页 |
2.2.20 ELISA法检测猫血清中特异性IgE抗体水平 | 第37页 |
2.2.21 统计分析 | 第37-38页 |
3 结果 | 第38-48页 |
3.1 FSA1基因的克隆及鉴定 | 第38-41页 |
3.1.1 原核表达质粒的鉴定结果 | 第38页 |
3.1.2 真核表达质粒的双酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
3.1.3 重组质粒pVAX1-FSA1转染BHK-21 细胞的RT-PCR鉴定结果 | 第39页 |
3.1.4 rFSA1蛋白的诱导表达条件优化结果 | 第39-40页 |
3.1.5 rFSA1蛋白的SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果 | 第40-41页 |
3.1.6 rFSA1蛋白和重组pVAX1-FSA1质粒的质量鉴定结果 | 第41页 |
3.2 猫FAD模型的建立 | 第41-45页 |
3.2.1 对猫FAD模型临床皮炎症状评分结果 | 第41-44页 |
3.2.2 猫外周血嗜酸性粒细胞所占比率统计结果 | 第44页 |
3.2.3 猫外周血T细胞增殖反应实验结果 | 第44-45页 |
3.2.4 猫血清中特异性IgE水平测定结果 | 第45页 |
3.3 应用宠物皮炎疫苗治疗猫FAD | 第45-46页 |
3.3.1 共免疫治疗猫FAD的临床皮炎评分结果 | 第45-46页 |
3.3.2 共免疫治疗对外周血T细胞增殖反应的影响 | 第46页 |
3.4 应用宠物皮炎疫苗预防猫FAD | 第46-48页 |
3.4.1 共免疫预防猫FAD的临床皮炎评分结果 | 第46-47页 |
3.4.2 共免疫预防对外周血T细胞增殖反应的影响 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-51页 |
4.1 宠物皮炎疫苗 | 第48页 |
4.2 共免疫机理 | 第48-49页 |
4.3 猫跳蚤过敏性皮炎模型的建立 | 第49-50页 |
4.4 宠物皮炎疫苗对猫FAD的防治效果 | 第50-51页 |
4.5 宠物皮炎疫苗对T淋巴细胞增殖的抑制效果 | 第51页 |
5 结论 | 第51-53页 |
致谢 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-59页 |
附录 | 第59页 |