| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 黑粉菌的分类学地位及生理特征 | 第12-13页 |
| 2 黑粉菌的侵染致病机理 | 第13-15页 |
| 3 黑粉菌与寄主植株的互作 | 第15-16页 |
| 4 黑粉菌的药用和食用价值 | 第16-18页 |
| ·药用价值 | 第16-17页 |
| ·食用价值 | 第17-18页 |
| 5 黑粉菌的研究进展 | 第18-26页 |
| ·作为研究病原性真菌致病机理的模式真菌 | 第18-21页 |
| ·作为研究动物细胞生理机制的模式真菌 | 第21-26页 |
| ·DNA修复机制 | 第22-23页 |
| ·远距离运输机制 | 第23-24页 |
| ·微管蛋白组织机制 | 第24-25页 |
| ·有丝分裂机制 | 第25-26页 |
| 6 研究目的和意义 | 第26-29页 |
| 第二章 真菌表达载体的构建 | 第29-42页 |
| 1 材料和方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·启动子及报告基因的PCR扩增 | 第30-33页 |
| ·T-A克隆并测序 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第34页 |
| ·质粒的小提 | 第34页 |
| ·农杆菌的转化 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·载体构建流程图 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增gpdA启动子 | 第36页 |
| ·pgpdA-pMD19-T载体的构建和验证 | 第36-37页 |
| ·真菌表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·重组载体的农杆菌转化和筛选 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 大麦坚黑粉菌生理特性研究 | 第42-48页 |
| 1 材料和方法 | 第42-44页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·大麦坚黑粉菌菌落和细胞形态的观察 | 第42-43页 |
| ·最佳生长温度的测定 | 第43页 |
| ·最佳PH值的测定 | 第43页 |
| ·最佳培养基组成的测定 | 第43-44页 |
| ·实验重复性 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·大麦坚黑粉菌的菌落和细胞形态 | 第44-45页 |
| ·大麦坚黑粉菌的最佳生长温度 | 第45页 |
| ·大麦坚黑粉菌生长的最佳pH值 | 第45-46页 |
| ·不同培养基对大麦坚黑粉菌生长的影响 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 大麦坚黑粉菌遗传转化体系优化 | 第48-62页 |
| 1 材料和方法 | 第48-53页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-53页 |
| ·筛选培养基抗生素浓度的确定 | 第49页 |
| ·PEG-CaCl_2法转化黑粉菌 | 第49-50页 |
| ·电击法转化黑粉菌 | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导的ATMT法转化黑粉菌 | 第51-52页 |
| ·影响农杆菌介导(ATMT)法转化黑粉菌效率的因素 | 第52页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第52页 |
| ·转化子基因组的提取 | 第52页 |
| ·Southern杂交 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-59页 |
| ·筛选培养基抗生素浓度的确定 | 第53页 |
| ·三种转化方法的转化效率比较 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导的ATMT法的参数优化 | 第54-57页 |
| ·农杆菌在AS中预培养对转化效率的影响 | 第54-55页 |
| ·农杆菌数目对大麦坚黑粉菌转化效率的影响 | 第55-56页 |
| ·共培养时间对转化效率的影响 | 第56-57页 |
| ·转化子稳定性的检测 | 第57页 |
| ·转化子的鉴定 | 第57-59页 |
| ·转化子基因组的提取 | 第57-58页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·转化子拷贝数的检测 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| ·ATMT法在大麦坚黑粉菌转化中优于其他遗传转化方法 | 第59-60页 |
| ·影响ATMT法转化效率的主要因子优化 | 第60-61页 |
| ·转化子的PCR鉴定及拷贝数验证 | 第61-62页 |
| 第五章 大麦坚黑粉菌侵染寄主 | 第62-74页 |
| 1 材料和方法 | 第62-64页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-64页 |
| ·单倍体菌株的体外配对结合 | 第62-63页 |
| ·大麦种子发芽培养 | 第63页 |
| ·黑粉菌侵染大麦和拟南芥 | 第63页 |
| ·侵染寄主组织的染色观察 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-71页 |
| ·单倍体大麦坚黑粉菌的体外配对 | 第64-66页 |
| ·单倍体在植株表面的配对结合及体内侵染 | 第66页 |
| ·大麦坚黑粉菌侵染拟南芥 | 第66-69页 |
| ·大麦坚黑粉菌侵染大麦 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| ·大麦坚黑粉菌的配对机制 | 第71-72页 |
| ·大麦坚黑粉菌的侵染对拟南芥生理的影响 | 第72-73页 |
| ·大麦坚黑粉菌的侵染对寄主大麦生理的影响 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83页 |