| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-52页 |
| 第一节 细胞凋亡 | 第19-25页 |
| 1 细胞凋亡的概念及其形态学特征 | 第19-20页 |
| 2 线粒体与细胞凋亡 | 第20-21页 |
| ·线粒体的功能及线粒体介导的细胞凋亡 | 第20-21页 |
| ·线粒膜电位、通透性转变与细胞凋亡 | 第20页 |
| ·细胞色素c与细胞凋亡 | 第20-21页 |
| ·Bcl-2家族调节线粒体凋亡途径 | 第21页 |
| 3 Fas死亡受体与细胞凋亡 | 第21-23页 |
| 4 p53与细胞凋亡 | 第23-25页 |
| 第二节 胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R) | 第25-28页 |
| 1 IGF-1R的分子结构和功能 | 第25页 |
| 2 IGF-1R对凋亡的调节 | 第25-28页 |
| ·启动促存活信号对抗凋亡 | 第25-26页 |
| ·IGF-1R对死亡受体和配体表达的调控 | 第26页 |
| ·IGF-1R对凋亡的转录因子活性的调控 | 第26-28页 |
| 第三节 细胞自噬概述 | 第28-35页 |
| 1 自噬的定义 | 第28页 |
| 2 自噬的分类 | 第28页 |
| 3 自噬体的发生过程 | 第28-31页 |
| 4 自噬的形成的分子基础和信号调控 | 第31-35页 |
| ·参与自噬体形成的相关复合物,组成蛋白及功能 | 第31-32页 |
| ·AMPK蛋白激酶和mTOR激酶对自噬的调控 | 第32页 |
| ·生长因子信号对自噬的调控 | 第32页 |
| ·Bcl-2家族蛋白对自噬的调控 | 第32-33页 |
| ·p53蛋白对自噬的调控 | 第33页 |
| ·Fas途径对自噬的调控 | 第33-35页 |
| 第四节 活性氧(ROS)概述 | 第35-40页 |
| 1 ROS的概念 | 第35页 |
| 2 ROS的来源及产生机制 | 第35-36页 |
| 3 ROS与凋亡的关系 | 第36-40页 |
| ·ROS作为第二信使参与促存活信号 | 第36-37页 |
| ·ROS诱导细胞死亡 | 第37-40页 |
| 第五节 水飞蓟宾(silibinin)分子药理机制研究进展 | 第40-43页 |
| 1 Silibinin的抗氧化作用 | 第40-41页 |
| 2 Silibinin对生长因子受体的调节作用 | 第41页 |
| 3 Silibinin的雌激素样作用 | 第41页 |
| 4 Silibinin的免疫调节作用 | 第41-42页 |
| 5 Silibinin的临床应用 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-51页 |
| 立题依据 | 第51-52页 |
| 第二章 Silibinin拮抗丝裂霉素C(mitomycin C)诱导的细胞凋亡机制研究 | 第52-72页 |
| 一、实验材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.实验材料 | 第52-53页 |
| ·细胞培养 | 第52-53页 |
| ·药品及试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| 2.实验方法 | 第53-56页 |
| ·MTT法分析生长抑制率 | 第53-54页 |
| ·形态学观察 | 第54页 |
| ·乳酸脱氢酶活力测定细胞死亡 | 第54页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第54页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第54-55页 |
| ·线粒体和胞浆提取物的制备 | 第55页 |
| ·胞浆和核提取物的制备 | 第55页 |
| ·罗丹明123法观察和测定线粒体膜电位 | 第55-56页 |
| ·统计学分析 | 第56页 |
| 二、实验结果 | 第56-65页 |
| 1.丝裂霉素C对A375-S2细胞的生长抑制作用 | 第56页 |
| 2.丝裂霉素C诱导的A375-S2细胞生长抑制能够被silibinin拮抗 | 第56-57页 |
| 3.丝裂霉素C诱导A375-S2细胞诱导死亡方式为凋亡,并且其诱导细胞凋亡作用能够被silibinin所拮抗 | 第57-59页 |
| 4.Silibinin抑制丝裂霉素C引起的caspase 9、3的激活及DNA片段化 | 第59-61页 |
| 5.丝裂霉素C诱导引起p53的增加和SIRT-1的降低被silibinin显著制 | 第61页 |
| 6.丝裂霉素C对FasL、FADD和pro-caspase 8的蛋白水平没有影响 | 第61-62页 |
| 7.Silibiin逆转丝裂霉素C诱导的线粒体膜电位的下降 | 第62-64页 |
| 8.Silibinin抑制丝裂霉素C诱导的Bcl-2的下调以及Bax和细胞色素c的转位 | 第64-65页 |
| 三、讨论 | 第65-67页 |
| 四、小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 第三章 silibinin诱导细胞自噬分子机制及自噬在丝裂霉素C诱导的细胞损伤中的作用 | 第72-91页 |
| 一、实验材料与方法 | 第72-74页 |
| 1.实验材料 | 第72-73页 |
| ·细胞培养 | 第72页 |
| ·药品及试剂 | 第72-73页 |
| ·仪器 | 第73页 |
| 2.实验方法 | 第73-74页 |
| ·MTT法分析生长抑制率 | 第73页 |
| ·MDC荧光染色的荧光显微镜和流式细胞术分析 | 第73页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第73页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第73-74页 |
| ·统计学分析 | 第74页 |
| 二、实验结果 | 第74-86页 |
| 1.Silibinin时间依赖性地抑制p53蛋白的表达 | 第74-75页 |
| 2.Silibinin时间依赖性地诱导细胞自噬 | 第75-76页 |
| 3.Silibinin处理的A375-2细胞中自噬被p53负调控 | 第76-79页 |
| 4.Silibinin以p53依赖的方式激活NF-κB诱导细胞自噬 | 第79-82页 |
| 5.Silibinin诱导的自噬拮抗丝裂霉素C诱导的细胞凋亡 | 第82-85页 |
| ·-MA抑制剂抑制自噬增加p53蛋白的表达,并且下调NF-κB | 第85-86页 |
| 三、讨论 | 第86-88页 |
| 四、小结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 第四章 Silibinin诱导活性氧的产生介导细胞存活 | 第91-120页 |
| 第一节 Silibinin通过诱导O_2~(·-)的产生保护细胞 | 第92-107页 |
| 一、实验材料与方法 | 第92-95页 |
| 1.实验材料 | 第92-93页 |
| ·细胞培养 | 第92页 |
| ·药品及试剂 | 第92-93页 |
| ·仪器 | 第93页 |
| 2.实验方法 | 第93-95页 |
| ·流式细胞术检测胞内ROS的含量 | 第93页 |
| ·SOD和CAT活力检测 | 第93-94页 |
| ·荧光显微镜观察ROS的产生 | 第94页 |
| ·细胞内线粒体复合物Ⅳ活力测定 | 第94-95页 |
| ·MTT法分析细胞生长抑制率 | 第95页 |
| ·线粒体提取物的制备 | 第95页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第95页 |
| ·荧光显微镜观察细胞核的形态学变化 | 第95页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第95页 |
| ·统计学分析 | 第95页 |
| 二、实验结果 | 第95-105页 |
| 1.Silibinin诱导A375-S2细胞ROS的产生 | 第95-97页 |
| 2.Silibinin通过降低线粒体复合物Ⅳ的活力诱导ROS产生 | 第97-99页 |
| 3.Silibinin抑制细胞色素c的表达 | 第99-100页 |
| 4.Silibinin诱导ROS产生的种类为O_2~(·-)和H_2O_2,且O_2~(·-)为ROS的主要形式 | 第100-102页 |
| 5. SOD清除O_2~(·-)诱导A375-S2细胞细胞生长抑制 | 第102-103页 |
| 6. SOD清除了O_2~(·-)诱导A375-S2细胞凋亡 | 第103-105页 |
| 三、讨论 | 第105-106页 |
| 四、小结 | 第106-107页 |
| 第二节 O_2~(·-)激活IGF-1R-PI3K-Akt和IGF-1R-PLC γ-PKC信号通路维持细飞蓟宾处理的胞存活 | 第107-116页 |
| 一、实验材料与方法 | 第107-109页 |
| 1.实验材料 | 第107-108页 |
| ·细胞培养 | 第107页 |
| ·药品及试剂 | 第107-108页 |
| ·仪器 | 第108页 |
| 2.实验方法 | 第108-109页 |
| ·IGF-1R酪氨酸激酶活力的测定 | 第108页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第108页 |
| ·MTT法分析细胞生长抑制 | 第108页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第108-109页 |
| ·统计学分析 | 第109页 |
| 二、实验结果 | 第109-114页 |
| 1.Silibinin能够时间依赖性地诱导IGF-1R酪氨酸激酶活力的升高 | 第109-110页 |
| 2.清除O_2~(·-)或抑制O~(2·-)向胞浆的扩散能够抑制IGF-1R酪氨酸激酶活力 | 第110-111页 |
| 3.O_2~(·-)促进、H_2O_2抑制silibinin诱导的IGF-1R及其下游信号蛋白的表达与活化 | 第111-112页 |
| 4.抑制IGF-1R或其下游PI3K-Akt和PLCγ-PKC途径引起细胞生长抑制 | 第112-113页 |
| 5.抑制IGF-1R或下游PI3K-Akt和PLCγ-PKC信号通路诱导细胞凋亡 | 第113-114页 |
| 三、讨论 | 第114-115页 |
| 四、小结 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-120页 |
| 第五章 IGF-1R在silibinin与Fas激动型抗体CHll协同诱导A375-S2细胞凋亡和自噬的中的作用 | 第120-138页 |
| 一、实验材料与方法 | 第120-122页 |
| 1.实验材料 | 第120-121页 |
| ·细胞培养 | 第120页 |
| ·药品及试剂 | 第120-121页 |
| ·仪器 | 第121页 |
| 2.实验方法 | 第121-122页 |
| ·MTT法分析生长抑制率 | 第121页 |
| ·形态学观察 | 第121页 |
| ·吖啶橙染色观察核内DNA的变化 | 第121-122页 |
| ·MDC染色的荧光显微镜观察和流式细胞术分析 | 第122页 |
| ·GFP-LC3转染 | 第122页 |
| ·免疫印迹法检测蛋白表达 | 第122页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第122页 |
| ·统计学分析 | 第122页 |
| 二、实验结果 | 第122-133页 |
| 1.Silibinin协同CH11诱导明显的细胞毒作用 | 第122-124页 |
| 2.Silibinin和CH11协同诱导细胞凋亡和自噬的典型特征 | 第124-125页 |
| 3.Silibnin与CH11共同作用诱导的自噬促进凋亡 | 第125-128页 |
| 4.Silibinin与CH11共同作用诱导Fas介导的凋亡且抑制Fas不影响自噬 | 第128-129页 |
| 5.Silibinin与CH11共同作用抑制IGF-1R的表达及其活化 | 第129-130页 |
| 6.抑制IGF-IR-PI3K-Akt信号通路促进Fas和FADD的表达,并增强silibinin与CH11共同作用诱导的凋亡 | 第130-131页 |
| 7. 抑制IGF-IR-PI3K-Akt信号通路通过Beclin-1非依赖的方式促进silibinin与CH11共同作用诱导的自噬 | 第131-133页 |
| 三、讨论 | 第133-134页 |
| 小结 | 第134页 |
| 总结与展望 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 缩略语说明 | 第139-141页 |
