| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 一 引言 | 第10-18页 |
| 1. 效应蛋白转运和分泌机制研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1 效应蛋白转运机制的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 酵母蛋白转运机制 | 第10-11页 |
| 1.1.2 植物病原细菌效应蛋白转运机制 | 第11页 |
| 1.1.3 植物病原菌真菌效应蛋白转运机制 | 第11-12页 |
| 1.1.4 植物病原卵菌效应蛋白转运机制 | 第12页 |
| 2. 分泌途径相关蛋白的研究进展 | 第12-15页 |
| 2.1 HSP70蛋白在分泌途径中的作用 | 第12-13页 |
| 2.1.1 HSP70蛋白 | 第12-13页 |
| 2.1.2 蛋白分泌相关基因LHS1 | 第13页 |
| 2.2 分泌复合物在蛋白分泌途径中的作用 | 第13-14页 |
| 2.2.1 分泌复合物 | 第13-14页 |
| 2.2.2 Sec6在蛋白分泌过程中的作用 | 第14页 |
| 2.3 其他蛋白家族在蛋白分泌途径中的作用 | 第14-15页 |
| 2.3.1 Rab蛋白家族 | 第14页 |
| 2.3.2 SNARE蛋白家族 | 第14-15页 |
| 2.3.3 SM蛋白家族 | 第15页 |
| 2.3.4 被膜蛋白复合物 | 第15页 |
| 3. 辣椒疫霉菌的危害及侵染循环 | 第15-16页 |
| 4. 本研究的意义 | 第16-18页 |
| 二. 材料与方法 | 第18-30页 |
| 1. 实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 供试菌株 | 第18页 |
| 1.2 培养条件和所用培养基 | 第18页 |
| 1.3 质粒载体 | 第18-20页 |
| 1.4 生化试剂 | 第20页 |
| 1.5 致病性测定所需植物材料 | 第20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-30页 |
| 2.1 辣椒疫霉中LHS1和Sec6的获得 | 第20页 |
| 2.2 LHS1和Sec6结构域的分析以及亚细胞定位的预测 | 第20页 |
| 2.3 不同生物中LHS1和Sec6的系统进化分析 | 第20-21页 |
| 2.4 LHS1和Sec6沉默载体构建 | 第21-22页 |
| 2.4.1 基因的设计和PCR扩增 | 第21页 |
| 2.4.2 PCR产物回收纯化以及TA克隆 | 第21页 |
| 2.4.3 沉默表达载体构建 | 第21-22页 |
| 2.5 辣椒疫霉菌原生质体的制备及转化 | 第22-23页 |
| 2.6 转化子RNA的提取和反转录 | 第23-25页 |
| 2.6.1 转化子RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.6.2 RNA的反转录 | 第24-25页 |
| 2.7 转化子验证 | 第25-26页 |
| 2.7.1 转化子的半定量验证 | 第25页 |
| 2.7.2 用Quantitative RT-PCR分析转化子中基因SEC6和LHS1的表达量 | 第25-26页 |
| 2.8 沉默突变体的表型分析 | 第26-28页 |
| 2.8.1 菌落的生长速率测定 | 第26页 |
| 2.8.2 菌丝和菌丝体形态分析 | 第26页 |
| 2.8.3 辣椒疫霉孢子囊形态和产量的观察 | 第26-27页 |
| 2.8.4 辣椒疫霉菌细胞壁敏感性测定 | 第27页 |
| 2.8.5 胞外酶的测定 | 第27页 |
| 2.8.6 辣椒疫霉侵染洋葱表皮实验 | 第27-28页 |
| 2.9 致病性测定 | 第28-30页 |
| 2.9.1 本氏烟草的叶片接种 | 第28页 |
| 2.9.2 辣椒感病植株叶片接种 | 第28页 |
| 2.9.3 辣椒感病植株下胚轴接种 | 第28页 |
| 2.9.4 辣椒疫霉菌对寄主植物侵入能力的实验 | 第28页 |
| 2.9.5 RT-PCR分析基因表达量 | 第28-29页 |
| 2.9.6 辣椒植株的下胚轴接种及DAB染色实验 | 第29页 |
| 2.9.7 辣椒疫霉激发子的测定 | 第29-30页 |
| 三. 结果与分析 | 第30-52页 |
| 1. PcLHS1基因功能的研究 | 第30-45页 |
| 1.1 辣椒疫霉菌PcLHS1的获得以及结构域和亚细胞定位的预测 | 第30页 |
| 1.2 PcLHS1的鉴定和进化分析 | 第30-31页 |
| 1.3 PcLHS1沉默突变体的获得 | 第31-32页 |
| 1.4 PcLHS1的沉默影响辣椒疫霉菌生长 | 第32-33页 |
| 1.5 PcLHS1的沉默对辣椒疫霉的产孢能力产生影响 | 第33-34页 |
| 1.6 PcLHS1与辣椒疫霉的致病性相关 | 第34-38页 |
| 1.7 PcLHS1的沉默影响辣椒疫霉的侵染能力 | 第38-40页 |
| 1.8 PcLHS1的沉默影响辣椒疫霉菌对过氧化氢的耐受性 | 第40-41页 |
| 1.9 PcLHS1沉默突变体对ER抑制剂敏感 | 第41-43页 |
| 1.10 PcLHS1影响辣椒疫霉某些胞外酶的分泌 | 第43-44页 |
| 1.11 PcLHS1影响辣椒疫霉毒性蛋白的分泌 | 第44-45页 |
| 2. PcSec6基因功能的研究 | 第45-52页 |
| 2.1 辣椒疫霉菌PcSec6的获得以及结构域和亚细胞定位的预测 | 第45页 |
| 2.2 PcSec6的鉴定和进化分析 | 第45-46页 |
| 2.3 PcSec6沉默突变体的获得 | 第46-47页 |
| 2.4 PcSec6的沉默影响辣椒疫霉菌生长 | 第47-48页 |
| 2.5 PcSec6的沉默对辣椒疫霉的产孢能力产生影响 | 第48-49页 |
| 2.6 PcSec6与辣椒疫霉的致病性相关 | 第49-52页 |
| 四. 小结与讨论 | 第52-54页 |
| 1. LHS1和Sec6在进化上具有保守性 | 第52页 |
| 2. PcLHS1和PcSec6影响辣椒疫霉菌的生长发育 | 第52-53页 |
| 3. PcLHS1和PcSec6与辣椒疫霉菌侵染能力有关 | 第53页 |
| 4. PcLHS1影响蛋白的分泌 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
