| 摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩写词表 | 第13-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-24页 |
| 1.1 用于基因治疗的病毒载体 | 第14-16页 |
| 1.1.1 腺病毒载体 | 第14-15页 |
| 1.1.2 逆转录病毒载体 | 第15页 |
| 1.1.3 慢病毒载体 | 第15-16页 |
| 1.1.4 腺相关病毒载体 | 第16页 |
| 1.2 腺相关病毒的概述 | 第16-21页 |
| 1.2.1 AAV的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 AAV的血清型 | 第17-18页 |
| 1.2.3 rAAV载体的生产与纯化 | 第18-20页 |
| 1.2.4 rAAV在基因治疗中的应用 | 第20-21页 |
| 1.3 课题研究意义 | 第21页 |
| 1.4 课题技术路线 | 第21-24页 |
| 第2章 双质粒转染法制备rAAV | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-30页 |
| 2.1.1 实验菌株细胞和载体 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.2.1 AAV1、5、8 DJ及9 cap基因的获得 | 第30-34页 |
| 2.2.2 携带AAV2 rep-cap腺病毒骨架载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.3 携带AAV2 rep及不同血清型cap基因腺病毒骨架载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.4 双质粒共转染制备rAAV | 第37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-42页 |
| 2.3.1 不同血清型AAV cap基因的扩增与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.2 携带AAV2 rep-cap腺病毒骨架载体的的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.3 携带AAV2 rep及不同血清型cap基因腺病毒骨架载体的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.4 双质粒共转染制备rAAV | 第40-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第3章 稳定细胞系法制备rAAV | 第44-64页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.1.1 实验菌株细胞和载体 | 第45页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-54页 |
| 3.2.1 同时表达Cre和AAV2 rep-cap细胞系的构建 | 第45-47页 |
| 3.2.2 用于测试Cre基因表达的检测载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.3 携带AAV2 rep及不同血清型cap基因慢病毒载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.4 用于rAAV制备的重组辅助腺病毒骨架载体的构建及纯化 | 第50-53页 |
| 3.2.5 潜在产生rAAV细胞系的构建 | 第53-54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-62页 |
| 3.3.1 同时携带Cre及AA2 rep-cap慢病毒载体的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.2 用于测试Cre基因表达的检测载体的鉴定 | 第55-58页 |
| 3.3.3 携带AAV2 rep及不同血清型cap基因慢病毒载体的鉴定 | 第58页 |
| 3.3.4 重组辅助腺病毒骨架载体的鉴定及病毒活力检测 | 第58-60页 |
| 3.3.5 潜在产生rAAV细胞系的建立及鉴定 | 第60-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第4章 总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 附录 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第86页 |
