| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 1 绪论 | 第9-29页 |
| 1.1 三维培养的研究背景和意义 | 第9页 |
| 1.2 三维培养的基本要素 | 第9-16页 |
| 1.2.1 三维培养的方法 | 第10-15页 |
| 1.2.2 细胞在3D培养中的接种方式 | 第15页 |
| 1.2.3 种子细胞的选择 | 第15-16页 |
| 1.3 水凝胶材料的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.3.1 水凝胶的定义 | 第16页 |
| 1.3.2 3D培养水凝胶材料的选择原则 | 第16-21页 |
| 1.3.3 水凝胶的制备机理 | 第21-22页 |
| 1.4 乳腺癌的研究进展及意义 | 第22-23页 |
| 1.5 雌激素受体α的概述 | 第23-25页 |
| 1.5.1 雌激素受体α的简介 | 第23-24页 |
| 1.5.2 雌激素受体的转录 | 第24-25页 |
| 1.6 泛素蛋白酶体系概述 | 第25-27页 |
| 1.6.1 泛素蛋白酶体途径概述 | 第25页 |
| 1.6.2 March5蛋白的概述 | 第25-27页 |
| 1.7 本论文的选题依据和研究内容 | 第27-29页 |
| 1.7.1 选题依据 | 第27-28页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第28-29页 |
| 2 明胶/γ-聚谷氨酸/透明质酸水凝胶的制备以及表征 | 第29-44页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第29-32页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第30页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第30-32页 |
| 2.2.4 种子细胞 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.3.1 材料浓度的确定 | 第32-33页 |
| 2.3.2 交联剂浓度的确定 | 第33页 |
| 2.3.3 凝胶时间的确定 | 第33页 |
| 2.3.4 明胶/γ-聚谷氨酸/透明质酸水凝胶的制备 | 第33页 |
| 2.3.5 Gel/γ-PGA/HA水凝胶机械性能的测定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 制备材料的形貌观察 | 第34页 |
| 2.3.7 傅里叶红外光谱的测定 | 第34页 |
| 2.3.8 Gel/γ-PGA/HA水凝胶3D细胞的接种 | 第34-35页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第35-43页 |
| 2.4.1 材料浓度对水凝胶形成的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.2 交联剂对水凝胶稳定性的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.3 温度和PH对凝胶时间的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.4 Gel/γ-PGA/HA水凝胶机械性能的表征以及反应体积比的确定 | 第38-40页 |
| 2.4.5 Gel/γ-PGA/HA水凝胶的红外分析 | 第40-41页 |
| 2.4.6 Gel/γ-PGA/HA水凝胶的电镜分析 | 第41-42页 |
| 2.4.7 细胞在Gel/γ-PGA/HA水凝胶中的生长状态 | 第42-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-44页 |
| 3 3D培养水凝胶系统的优化 | 第44-57页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第44页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第44页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.3.1 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶的制备 | 第44-45页 |
| 3.3.2 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶机械性能的测定 | 第45页 |
| 3.3.3 制备材料的形貌观察 | 第45页 |
| 3.3.4 傅里叶红外光谱的测定 | 第45页 |
| 3.3.5 水凝胶Zeta电位和粒度的分析 | 第45页 |
| 3.3.6 细胞的培养 | 第45-46页 |
| 3.3.7 MTT增殖实验检测 | 第46-47页 |
| 3.4 结果分析 | 第47-55页 |
| 3.4.1 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶支架的孔隙率 | 第47页 |
| 3.4.2 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶支架的溶胀比 | 第47-48页 |
| 3.4.3 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶支架的吸水率 | 第48-49页 |
| 3.4.4 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶支架的外观图 | 第49页 |
| 3.4.5 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶的电镜分析 | 第49-50页 |
| 3.4.6 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶的Zeta电位和粒度分析 | 第50-51页 |
| 3.4.7 Matrigel/Gel/γ-PGA/HA水凝胶的红外分析 | 第51-52页 |
| 3.4.8 乳腺癌MCF-7细胞2D和3D培养 | 第52-53页 |
| 3.4.9 3D培养MCF-7细胞增殖速率的对比 | 第53-54页 |
| 3.4.10 细胞死活检测 | 第54-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-57页 |
| 4 3D培养条件下March5对ERα的影响 | 第57-68页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 实验仪器与试剂 | 第57-58页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第57页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第57-58页 |
| 4.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.3.1 细胞培养方法 | 第58页 |
| 4.3.2 质粒转化方法 | 第58页 |
| 4.3.3 质粒提取方法 | 第58-59页 |
| 4.3.4 转染及蛋白样品制备 | 第59-60页 |
| 4.3.5 免疫印迹(Western Blot) | 第60-61页 |
| 4.3.6 RNA提取 | 第61页 |
| 4.3.7 反转录PCR | 第61-62页 |
| 4.3.8 实时定量PCR | 第62-63页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第63-67页 |
| 4.4.1 内源March5和ERα蛋白水平检测 | 第63页 |
| 4.4.2 外源March5和ERα质粒蛋白水平检测 | 第63-64页 |
| 4.4.3 三维培养的MCF-7细胞中March5和ERα的相互作用 | 第64-66页 |
| 4.4.4 March5对ERα在转录水平上的影响 | 第66-67页 |
| 4.5 小结 | 第67-68页 |
| 5 结论与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68页 |
| 5.2 创新点摘要 | 第68-69页 |
| 5.3 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
