| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 基因功能研究方法进展 | 第11-12页 |
| 1.1.1 反向遗传学技术 | 第11页 |
| 1.1.2 基因功能研究实验方法 | 第11-12页 |
| 1.2 PEG介导的遗传转化研究 | 第12-16页 |
| 1.2.1 转化方法概述 | 第12-14页 |
| 1.2.2 小立碗藓基因打靶技术 | 第14-16页 |
| 1.3 肉桂醇脱氢酶 | 第16-19页 |
| 1.3.1 木质素生物合成途径 | 第16-17页 |
| 1.3.2 肉桂醇脱氢酶的基本特性 | 第17-19页 |
| 1.4 小立碗藓的类木质素研究 | 第19-20页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料、病原菌及载体 | 第21页 |
| 2.1.2 主要器材 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验所用试剂及培养基的配制方法 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 PEG介导小立碗藓原生质体遗传转化的条件优化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 CAD1-PTFH 15.3和CAD1-GFP-PTN182载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.3 PEG介导目的基因的转化及转化株的鉴定 | 第28-31页 |
| 2.2.4 灰霉菌胁迫下CAD1功能研究 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-46页 |
| 3.1 PEG介导的小立碗藓原生质体遗传转化的条件优化 | 第33-37页 |
| 3.1.1 原丝体的制备 | 第33页 |
| 3.1.2 FDA工作时间的优化 | 第33-34页 |
| 3.1.3 原生质体的制备条件优化及活性检测 | 第34-35页 |
| 3.1.4 原生质体再生 | 第35-36页 |
| 3.1.5 PEG工作浓度的优化 | 第36-37页 |
| 3.2 GFP-CAD1-PTN182和CAD1-PTFH15.3载体的构建过程 | 第37-41页 |
| 3.2.1 目的基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.2 目的基因与载体连接和转化验证过程 | 第38-40页 |
| 3.2.3 序列比对结果 | 第40-41页 |
| 3.3 PEG介导的遗传转化及转化株的鉴定过程 | 第41-44页 |
| 3.3.1 PEG介导的原生质体融合与抗性筛选 | 第41-42页 |
| 3.3.2 分子水平上对转化株进行鉴定 | 第42-44页 |
| 3.4 灰霉菌胁迫下CAD1功能验证 | 第44-46页 |
| 3.4.1 HPLC法检测小立碗藓转化株酚类物质的变化 | 第44页 |
| 3.4.2 灰霉菌感染小立碗藓细胞的行为观察 | 第44-45页 |
| 3.4.3 侵入菌丝形成率 | 第45-46页 |
| 4 讨论及结论 | 第46-51页 |
| 4.1 PEG介导的原生质体转化条件的优化 | 第46-47页 |
| 4.2 CAD1功能的验证 | 第47-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
| 附录1 | 第59-60页 |
| 附录2 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 发表的论文 | 第65页 |
