| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 鱼类肌间骨研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1 鱼类肌间骨形态学 | 第12-13页 |
| 1.2 鱼类肌间骨发生发育 | 第13-14页 |
| 1.3 肌间骨的作用 | 第14页 |
| 1.4 肌间骨形成潜在分子机制 | 第14-16页 |
| 2 BMP及其相关基因研究进展 | 第16-19页 |
| 2.1 BMP基因的发现 | 第16页 |
| 2.2 BMP基因组成及结构 | 第16-17页 |
| 2.3 BMP基因的生物学功能 | 第17-18页 |
| 2.3.1 BMPs的成骨作用 | 第17-18页 |
| 2.3.2 BMPs的其他作用 | 第18页 |
| 2.4 BMPs信号通路 | 第18页 |
| 2.5 鱼类BMPs及其相关基因功能研究 | 第18-19页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 团头鲂9个BMP家族基因的cDNA克隆及序列分析 | 第21-35页 |
| 1 引言 | 第21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验试剂和药品 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.3 反转录实验 | 第23-24页 |
| 2.2.4 Bmp3cDNA克隆 | 第24-28页 |
| 2.2.5 Bmp2a、bmp2b、bmp4、bmp5、bmp7b、bmp8a、bmp14和bmp16cDNA克隆 | 第28页 |
| 2.2.6 cDNA序列同源性分析 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-33页 |
| 3.1 序列特征分析 | 第29-31页 |
| 3.2 系统进化分析 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 BMP家族基因在一龄和二龄团头鲂组织中以及在肌间骨不同发育时期的表达分析 | 第35-45页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料和方法 | 第35-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第35页 |
| 2.1.2 实验试剂和药品 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.2.1 样品的采集 | 第36页 |
| 2.2.2 RNA提取 | 第36页 |
| 2.2.3 反转录实验 | 第36页 |
| 2.2.4 半定量分析BMP基因在一龄和二龄团头鲂中的组织分布 | 第36-37页 |
| 2.2.5 QRT-PCR分析BMP基因在肌间骨不同发育时期的表达量变化 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-41页 |
| 3.1 BMP基因在一龄及二龄团头鲂中的组织分布 | 第37-38页 |
| 3.2 BMP基因在团头鲂肌间骨不同发育时期的表达 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41-45页 |
| 第四章 Bmp3斑马鱼突变体与野生斑马鱼的骨骼差异分析 | 第45-64页 |
| 1 引言 | 第45-46页 |
| 2 材料和方法 | 第46-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第46页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第46页 |
| 2.1.2 实验试剂和药品 | 第46页 |
| 2.2 实验方法 | 第46-58页 |
| 2.2.1 斑马鱼的养殖 | 第46页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计 | 第46-47页 |
| 2.2.3 构建gRNA表达载体以及gRNA体外合成 | 第47-50页 |
| 2.2.4 Cas9核酸酶表达载体结构以及Cas9mRNA的合成 | 第50-51页 |
| 2.2.5 斑马鱼胚胎的显微注射 | 第51-52页 |
| 2.2.6 T7E1法和Sanger测序检测靶位点的有效性 | 第52-53页 |
| 2.2.7 斑马鱼突变体的筛选 | 第53-56页 |
| 2.2.8 骨骼茜素红染色 | 第56-57页 |
| 2.2.9 QRT-PCR分析上下游基因变化 | 第57-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-62页 |
| 3.1 靶位点的有效性检测 | 第58页 |
| 3.2 F_0代突变体的筛选结果 | 第58-59页 |
| 3.3 F_2代突变体的筛选结果 | 第59页 |
| 3.4 Bmp3突变体和野生型斑马鱼的骨骼表型比较 | 第59-61页 |
| 3.5 Bmp3相关基因在突变体和野生型斑马鱼中的表达量比较 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-77页 |
| 附录 | 第77-90页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
