| 中文摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 英文缩略词表 | 第15-18页 |
| 文献综述 | 第18-49页 |
| 第一节 青藤碱抗肿瘤作用机制研究进展 | 第18-27页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 第二节 自噬对肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移的生物学作用研究进展 | 第27-49页 |
| 参考文献 | 第38-49页 |
| 前言 | 第49-51页 |
| 本课题的研究内容、目的和意义 | 第51-53页 |
| 第一部分 青藤碱通过促进活性氧簇生成和自噬-溶酶体通路活化,抑制人脑胶质瘤细胞增殖的作用研究 | 第53-94页 |
| 1 实验材料 | 第54-56页 |
| 1.1 主要实验试剂和耗材 | 第54-55页 |
| 1.2 实验用抗体 | 第55页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第55-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-66页 |
| 2.1 细胞传代 | 第56-57页 |
| 2.2 细胞计数 | 第57页 |
| 2.3 细胞冻存 | 第57页 |
| 2.4 细胞复苏 | 第57-58页 |
| 2.5 细胞培养和处理 | 第58页 |
| 2.6 细胞存活率检测 | 第58页 |
| 2.7 乳酸脱氢酶(LDH)检测 | 第58页 |
| 2.8 集落形成实验 | 第58-59页 |
| 2.9 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测 | 第59页 |
| 2.10 ROS检测 | 第59页 |
| 2.11 透射电子显微镜检测 | 第59-60页 |
| 2.12 激光共聚焦显微镜检测 | 第60页 |
| 2.13 干扰RNA (siRNA)实验 | 第60-61页 |
| 2.14 免疫印迹实验 | 第61-64页 |
| 2.15 动物和处理 | 第64页 |
| 2.16 免疫组化 | 第64-66页 |
| 2.17 统计学分析 | 第66页 |
| 3 实验结果 | 第66-84页 |
| 3.1 SH通过caspase非依赖途径抑制人脑胶质瘤细胞增殖 | 第66-69页 |
| 3.2 SH通过诱导自噬抑制人脑胶质瘤细胞增殖 | 第69-73页 |
| 3.3 SH通过促进ROS产生介导人脑胶质瘤细胞自噬性死亡 | 第73-76页 |
| 3.4 SH通过抑制Akt-mTOR信号通路以及激活JNK信号通路诱导人脑胶质瘤细胞自噬 | 第76-79页 |
| 3.5 ROS产生是SH介导的人脑胶质瘤细胞内Akt-mTOR信号通路抑制和JNK信号通路活化的上游途径 | 第79-80页 |
| 3.6 SH促进了人脑胶质瘤细胞内溶酶体的生物合成 | 第80-82页 |
| 3.7 SH在体内实验中抑制了人脑胶质瘤细胞增殖 | 第82-84页 |
| 4 小结与讨论 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 第二部分 青藤碱通过降低基质金属蛋白酶-2/-9的表达水平以及逆转内源性或者外源性的上皮间质转化,抑制人脑胶质瘤细胞侵袭、迁移的作用研究 | 第94-133页 |
| 1 实验材料 | 第96-98页 |
| 1.1 主要实验试剂和耗材 | 第96页 |
| 1.2 实验用抗体 | 第96-97页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第97-98页 |
| 2 实验方法 | 第98-106页 |
| 2.1 细胞传代 | 第98页 |
| 2.2 细胞计数 | 第98页 |
| 2.3 细胞冻存 | 第98页 |
| 2.4 细胞复苏 | 第98页 |
| 2.5 细胞培养和处理 | 第98-99页 |
| 2.6 细胞存活率检测 | 第99页 |
| 2.7 细胞周期检测 | 第99页 |
| 2.8 细胞迁移和侵袭的离体实验 | 第99-100页 |
| 2.9 实时荧光定量PCR (QPCR)实验 | 第100-102页 |
| 2.10 免疫共沉淀(Co-IP)实验 | 第102-103页 |
| 2.11 激光共聚焦显微镜检测 | 第103-104页 |
| 2.12 质粒与siRNA转染 | 第104页 |
| 2.13 细胞内Ca~(2+)浓度检测 | 第104-105页 |
| 2.14 酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第105页 |
| 2.15 免疫印迹实验 | 第105页 |
| 2.16 免疫组化 | 第105-106页 |
| 2.17 统计学分析 | 第106页 |
| 3 实验结果 | 第106-122页 |
| 3.1 SH选择性地杀伤了人脑胶质瘤细胞,并且诱导了人脑胶质瘤细胞周期阻滞 | 第106-108页 |
| 3.2 SH降低了人脑胶质瘤细胞侵袭、迁移的能力 | 第108-110页 |
| 3.3 SH通过钝化NFκB,降低人脑胶质瘤细胞内MMP-2/-9的表达水平 | 第110-114页 |
| 3.4 SH通过ER应激介导的自噬逆转了内源性的EMT,从而抑制了人脑胶质瘤细胞的侵袭 | 第114-117页 |
| 3.5 SH抑制了肿瘤炎症微环境刺激下人脑胶质瘤细胞外源性的EMT及侵袭能力的增强 | 第117-120页 |
| 3.6 SH调节了体内实验中与人脑胶质瘤细胞增殖和转移相关的蛋白表达水平 | 第120-122页 |
| 4 小结与讨论 | 第122-125页 |
| 参考文献 | 第125-133页 |
| 全文总结 | 第133-135页 |
| 个人简历 | 第135-136页 |
| 博士在读期间学术成果 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 附件 | 第140-143页 |
