| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 抗肿瘤天然产物的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 抗肿瘤天然产物CC-1065研究现状及前期的研究基础 | 第13-15页 |
| 1.3 CC-1065主要研究策略和目标 | 第15-16页 |
| 1.4 抗肿瘤抗生素CC-1065研究意义 | 第16-17页 |
| 1.5 抗肿瘤新型环肽YM-216391研究现状及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21页 |
| 2.1.6 裂解和缓冲溶液 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 钙法感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.2 感受态细胞的转化 | 第23页 |
| 2.2.3 PCR处理和PCR产物的克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.4 DNA连接与酶切 | 第25页 |
| 2.2.5 Streptomyces NRRL11183孢子的制备 | 第25页 |
| 2.2.6 Streptomyces NRRL11183和E.coli S17-1属间接合转移 | 第25页 |
| 2.2.7 接合子筛选与双交换突变株的验证 | 第25-26页 |
| 2.2.8 Streptomyces NRRL11183突变株发酵产物的提取和HPLC检测 | 第26-27页 |
| 第三章 抗肿瘤天然产物CC-1065生物合成机制研究 | 第27-51页 |
| 3.1 抗肿瘤天然产物CC-1065生物合成基因簇的功能分析 | 第27-30页 |
| 3.2 CC-1065可能的生物合成途径 | 第30-33页 |
| 3.3 基因功能研究 | 第33-50页 |
| 3.3.1 c10V基因功能研究 | 第34-36页 |
| 3.3.2 c10K基因功能研究 | 第36-38页 |
| 3.3.3 c1OS基因功能研究 | 第38-39页 |
| 3.3.4 c10E基因功能研究 | 第39-40页 |
| 3.3.5 c10O基因功能研究 | 第40-42页 |
| 3.3.6 c10W基因功能研究 | 第42-43页 |
| 3.3.7 c10D基因功能研究 | 第43-44页 |
| 3.3.8 c10R6基因功能研究 | 第44-45页 |
| 3.3.9 c10R5基因功能研究 | 第45-49页 |
| 3.3.10 c10A基因功能研究 | 第49-50页 |
| 3.4 本章总结 | 第50-51页 |
| 第四章 抗肿瘤环肽YM-216391在异源宿主中的生物合成 | 第51-57页 |
| 4.1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 培养基、材料 | 第51-52页 |
| 4.1.3 属间接合转移 | 第52页 |
| 4.1.4 发酵及产物分离 | 第52页 |
| 4.1.5 HPLC及质谱检测 | 第52-53页 |
| 4.2 结果 | 第53-55页 |
| 4.2.1 基因工程菌株构建及鉴定 | 第53页 |
| 4.2.2 基因工程菌株产生YM-2163HPLC定性分析 | 第53-54页 |
| 4.2.3 基因工程菌株合成YM-216391的质谱鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 附录1: 本工作中构建的质粒及测序引物 | 第60-65页 |
| 附表1.1 构建的重组质粒 | 第60-62页 |
| 附表1.2 用于PCR引物 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 硕士期间发表论文目录 | 第67页 |
