| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-30页 |
| 1.1 哺乳动物多能性干细胞研究概况 | 第15-21页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞 | 第15-17页 |
| 1.1.2 核移植胚胎干细胞 | 第17-19页 |
| 1.1.3 诱导多能性干细胞 | 第19-21页 |
| 1.2 大鼠胚胎干细胞研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2.1 大鼠胚胎干细胞研究历史 | 第21页 |
| 1.2.2 大鼠及小鼠胚胎干细胞的多能信号通路 | 第21-22页 |
| 1.2.3 大鼠胚胎干细胞系的建立 | 第22-23页 |
| 1.3 孤雄及孤雌胚胎干细胞系 | 第23-24页 |
| 1.3.1 孤雄及孤雌单倍体胚胎的构建技术 | 第23页 |
| 1.3.2 孤雄及孤雌胚胎干细胞的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 孤雌及孤雄单倍体ESCs | 第24-26页 |
| 1.4.1 单倍体孤雌及孤雄胚胎干细胞系的建立 | 第24-25页 |
| 1.4.2 单倍体胚胎干细胞系的特征 | 第25页 |
| 1.4.3 单倍体胚胎干细胞系在转基因上的应用 | 第25-26页 |
| 1.5 印记与单倍体发育 | 第26-28页 |
| 1.5.1 印记基因特征 | 第26页 |
| 1.5.2 印记基因簇的两种顺式沉默模型 | 第26-27页 |
| 1.5.3 印记基因簇内的小RNA | 第27页 |
| 1.5.4 原始生殖细胞的印记重编程 | 第27-28页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-45页 |
| 2.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要仪器和耗材 | 第31-32页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-44页 |
| 2.2.1 大鼠单倍体胚胎的获取与移植 | 第32-34页 |
| 2.2.2 RhESCs系的建立 | 第34-35页 |
| 2.2.3 RhESCs的多能性鉴定 | 第35-39页 |
| 2.2.4 RhESCs嵌合体制作 | 第39-40页 |
| 2.2.5 RhESCs卵胞浆内注射 | 第40-42页 |
| 2.2.6 对孤雄单倍体胚胎干细胞进行转基因操作 | 第42页 |
| 2.2.7 亚硫酸氢盐测序 | 第42-44页 |
| 2.3 数据统计分析 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-63页 |
| 3.1 大鼠孤雌孤雄单倍体囊胚的获取 | 第45-47页 |
| 3.1.1 高效获取大鼠受精卵方法的优化 | 第45页 |
| 3.1.2 不同方案获取大鼠单倍体囊胚 | 第45-47页 |
| 3.2 RhESCs系的建立 | 第47-53页 |
| 3.2.1 建立RhESCs | 第47-48页 |
| 3.2.2 RhESCs的性别鉴定 | 第48页 |
| 3.2.3 RhESCs的核型 | 第48-49页 |
| 3.2.4 RhESCs的单倍体纯化 | 第49-50页 |
| 3.2.5 大鼠单倍体胚胎干细胞进行品系及父母本来源进行鉴定 | 第50页 |
| 3.2.6 大鼠单倍体胚胎干细胞得多能性特点的鉴定 | 第50页 |
| 3.2.7 RhESCs的表达谱分析 | 第50-52页 |
| 3.2.8 RhESCs的印记基因甲基化状态 | 第52-53页 |
| 3.3 RhESCs的分化能力以及体内发育能力 | 第53-57页 |
| 3.3.1 RhESCs的转基因操作及荧光标记 | 第53-54页 |
| 3.3.2 RhESCs发育形成畸胎瘤的能力 | 第54页 |
| 3.3.3 RhESCs嵌合体制备 | 第54-56页 |
| 3.3.4 RhESCs种系嵌合的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.4 大鼠单倍体胚胎干细胞的遗传学操作 | 第57-59页 |
| 3.4.1 基于单倍体的全基因组范围的随机突变引入 | 第57-58页 |
| 3.4.2 基于定点打靶的大鼠单倍体胚胎干细胞的基因操作 | 第58-59页 |
| 3.5 RhESCs卵胞浆内注射获得可育大鼠 | 第59-63页 |
| 3.5.1 克服大鼠卵母细胞活化的障碍进行卵胞浆单精子或RhESC注射 | 第59-60页 |
| 3.5.2 RhESCs替代大鼠精子产生ICAI后代 | 第60-61页 |
| 3.5.3 RhESCs卵胞浆内注射胚胎体内发育 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-69页 |
| 4.1 大鼠单倍体胚胎干细胞系的建立 | 第63-64页 |
| 4.2 RhESCs的基因大规模筛选模型建立 | 第64页 |
| 4.3 RhESCs种系嵌合以及通过ICRAI获得转基因大鼠 | 第64-65页 |
| 4.4 二倍体细胞减数分裂是获得单倍体细胞的另一途径 | 第65-68页 |
| 4.4.1 纺锤丝微管与极蛋白B激酶(Aurora B Kinase) | 第65-66页 |
| 4.4.2 借助内聚力和张力实现姐妹染色体的识别与双定向 | 第66页 |
| 4.4.3 姐妹染色单体内聚力 | 第66-67页 |
| 4.4.4 一个内聚体周期,两次细胞分裂 | 第67-68页 |
| 4.5 展望 | 第68-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第79页 |
