| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 引言 | 第12-26页 |
| 1 CMYA1基因的研究进展 | 第12-14页 |
| 2 启动子的研究进展 | 第14-18页 |
| 2.1 启动子的概述 | 第14-16页 |
| 2.2 肌肉特异性启动子的研究进展 | 第16-18页 |
| 3 筛选启动子应用的主要技术 | 第18-24页 |
| 3.1 PCR技术 | 第18-19页 |
| 3.1.1 荧光定量PCR技术 | 第19页 |
| 3.2 载体构建技术 | 第19页 |
| 3.3 细胞培养 | 第19-21页 |
| 3.4 细胞转染技术 | 第21-22页 |
| 3.5 双荧光素酶报告基因系统 | 第22-24页 |
| 4. 本研究的目的及意义 | 第24-26页 |
| 第一章 CMYA1基因肌肉特异性表达验证及其启动子的克隆 | 第26-39页 |
| 1 实验材料与方法 | 第26-34页 |
| 1.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.1.2 主要仪器和设备 | 第27页 |
| 1.1.3 序列合成和测序 | 第27页 |
| 1.2 方法 | 第27-34页 |
| 1.2.1 RNA抽提 | 第27页 |
| 1.2.2 反转录 | 第27-28页 |
| 1.2.3 荧光定量PCR检测 | 第28页 |
| 1.2.4 全血DNA基因组的提取 | 第28-30页 |
| 1.2.5 CMYA1启动子扩增 | 第30页 |
| 1.2.6 p EGFP1CMYA1-promoter载体构建 | 第30-31页 |
| 1.2.7 无内毒素质粒提取 | 第31-32页 |
| 1.2.8 细胞培养 | 第32-33页 |
| 1.2.9 p EGFP1CMYA1启动子转染牛成纤维细胞和小鼠成肌细胞 | 第33-34页 |
| 2 结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.1 结果 | 第34-38页 |
| 2.1.1 CMYA1基因在肌肉中特异性表达 | 第34-36页 |
| 2.1.2 CMYA1启动子具有活性以及肌肉特异性 | 第36-38页 |
| 2.2 讨论 | 第38-39页 |
| 第二章 CMYA1肌肉特异性核心启动子的筛选及验证 | 第39-49页 |
| 1 实验材料与方法 | 第39-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 主要试剂及工具酶 | 第39-40页 |
| 1.1.2 序列合成和测序 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-43页 |
| 1.2.1 CMYA1启动子缺失引物设计及p GL3-Basic-CMYA1-promoter载体构建 | 第40-41页 |
| 1.2.2 转染C2C12细胞 | 第41-42页 |
| 1.2.3 双荧光素酶报告基因检测 | 第42页 |
| 1.2.4 p EGFP1P7启动子载体构建 | 第42页 |
| 1.2.5 PEGFP1P7转染牛成纤维细胞和小鼠成肌细胞 | 第42-43页 |
| 2 结果与讨论 | 第43-49页 |
| 2.1 结果 | 第43-47页 |
| 2.1.1 成功构建启动子缺失片段载体8个 | 第43-44页 |
| 2.1.2 成功筛选核心启动子并验证其具有活性以及肌肉特异性 | 第44页 |
| 2.1.3 预测CMYA1核心启动子肌肉特异性转录因子 | 第44-47页 |
| 2.2 讨论 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-51页 |
| 1.牛 CMYA1 基因为肌肉组织特异性表达基因 | 第49页 |
| 2. 克隆牛CMYA1启动子 1155bp并验证活性与肌肉特异性 | 第49页 |
| 3.获得 CMYA1 肌肉特异性核心启动子 477bp | 第49页 |
| 4. 后续研究 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-62页 |
| 1 载体示意图 | 第59-60页 |
| 2 CMYA1肌肉特异性启动子序列（1155bp） | 第60页 |
| 3 CMYA1肌肉特异性核心启动子序列（477bp） | 第60-61页 |
| 4 本文常用英文缩写词 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第62页 |
