| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第1章 金属硫蛋白基因沉默型MCF-7 细胞株构建 | 第13-25页 |
| 1.1 材料 | 第13-15页 |
| 1.1.1 菌株、质粒与细胞 | 第13页 |
| 1.1.2 试剂和酶 | 第13页 |
| 1.1.3 主要试剂配制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第14-15页 |
| 1.2 方法 | 第15-21页 |
| 1.2.1 干扰载体构建 | 第15页 |
| 1.2.2 载体转染乳腺癌细胞 | 第15-16页 |
| 1.2.3 细胞转染率检验 | 第16页 |
| 1.2.4 RNA表达检测 | 第16-19页 |
| 1.2.5 蛋白表达检测（western blot） | 第19-21页 |
| 1.3 结果 | 第21-23页 |
| 1.3.1 干扰载体转染效率 | 第21-22页 |
| 1.3.2 RNA表达检测 | 第22-23页 |
| 1.3.3 MT2A蛋白检测 | 第23页 |
| 1.4 小结 | 第23-25页 |
| 第2章 乳腺癌转移基因表达变化 | 第25-39页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂及工具酶 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 乳腺癌细胞培养 | 第26页 |
| 2.2.2 乳腺癌细胞繁殖变化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 细胞-基质黏附试验 | 第27页 |
| 2.2.4 总RNA的提取及cDNA合成 | 第27-29页 |
| 2.2.6 Real time PCR引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2.7 Western blot分析 | 第30-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-37页 |
| 2.3.1 MT2A基因沉默型细胞繁殖速度变化 | 第32-33页 |
| 2.3.2 乳腺癌细胞黏附能力变化 | 第33页 |
| 2.3.3 FGF-1 基因表达变化 | 第33-34页 |
| 2.3.4 Twist基因表达变化 | 第34-35页 |
| 2.3.5 转铁蛋白基因表达变化 | 第35页 |
| 2.3.6 AOP-1 基因表达变化 | 第35-36页 |
| 2.3.7 过氧化还原酶6基因表达变化 | 第36-37页 |
| 2.3.8 蛋白表达分析 | 第37页 |
| 3.4 小结 | 第37-39页 |
| 第3章 MT2A与β -domain过表达对细胞增殖和细胞色素氧化酶的影响 | 第39-53页 |
| 3.1 材料和方法 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株与细胞 | 第39页 |
| 3.1.2 基因组来源 | 第39页 |
| 3.1.3 实验试剂与器材 | 第39页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第39-40页 |
| 3.2 金属硫蛋白基因MT-2A获得 | 第40-44页 |
| 3.2.1 基因组获取 | 第40页 |
| 3.2.2 MT2A基因克隆 | 第40-42页 |
| 3.2.3 载体转化与筛选、测序 | 第42-44页 |
| 3.3 pEGFP-MT2A表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.4 重组表达质粒pEGFP-MT2A的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.5 β -domain过表达载体构建 | 第46页 |
| 3.6 细胞色素氧化酶基因 | 第46-47页 |
| 3.7 实时定量PCR引物 | 第47-48页 |
| 3.8 提取总RNA及获得cDNA | 第48页 |
| 3.9 细胞色素c氧化酶 6B2表达分析 | 第48页 |
| 3.10 结果 | 第48-51页 |
| 3.10.1 MT2A基因克隆 | 第48-50页 |
| 3.10.2 MT2A和β -domain过表达细胞株繁殖变化 | 第50页 |
| 3.10.3 6B2亚基表达变化 | 第50-51页 |
| 3.11 小结 | 第51-53页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第53-55页 |
| 第5章 综述 乳腺癌转移关联基因与金属硫蛋白基因 | 第55-62页 |
| 5.1 乳腺癌概况 | 第55页 |
| 5.2 乳腺癌转移相关基因的研究进展 | 第55-59页 |
| 5.2.1 基因组水平研究 | 第55-57页 |
| 5.2.2 蛋白组学研究 | 第57-58页 |
| 5.2.3 细胞膜转移蛋白质 | 第58页 |
| 5.2.4 分泌蛋白研究 | 第58-59页 |
| 5.3 金属硫蛋白MT | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 附录A 乳腺癌细胞 | 第68-69页 |
| 附录B 实时定量PCR运行结果分析 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 导师简介 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 学位论文数据集 | 第73页 |
