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金属硫蛋白沉默对乳腺癌转移基因表达的影响

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
英文缩略表第11-12页
引言第12-13页
第1章 金属硫蛋白基因沉默型MCF-7 细胞株构建第13-25页
    1.1 材料第13-15页
        1.1.1 菌株、质粒与细胞第13页
        1.1.2 试剂和酶第13页
        1.1.3 主要试剂配制第13-14页
        1.1.4 主要仪器设备第14-15页
    1.2 方法第15-21页
        1.2.1 干扰载体构建第15页
        1.2.2 载体转染乳腺癌细胞第15-16页
        1.2.3 细胞转染率检验第16页
        1.2.4 RNA表达检测第16-19页
        1.2.5 蛋白表达检测(western blot)第19-21页
    1.3 结果第21-23页
        1.3.1 干扰载体转染效率第21-22页
        1.3.2 RNA表达检测第22-23页
        1.3.3 MT2A蛋白检测第23页
    1.4 小结第23-25页
第2章 乳腺癌转移基因表达变化第25-39页
    2.1 材料与仪器第25-26页
        2.1.1 细胞株第25页
        2.1.2 试剂及工具酶第25-26页
        2.1.3 主要仪器第26页
        2.1.4 主要试剂的配制第26页
    2.2 方法第26-32页
        2.2.1 乳腺癌细胞培养第26页
        2.2.2 乳腺癌细胞繁殖变化第26-27页
        2.2.3 细胞-基质黏附试验第27页
        2.2.4 总RNA的提取及cDNA合成第27-29页
        2.2.6 Real time PCR引物设计第29-30页
        2.2.7 Western blot分析第30-32页
    2.3 结果第32-37页
        2.3.1 MT2A基因沉默型细胞繁殖速度变化第32-33页
        2.3.2 乳腺癌细胞黏附能力变化第33页
        2.3.3 FGF-1 基因表达变化第33-34页
        2.3.4 Twist基因表达变化第34-35页
        2.3.5 转铁蛋白基因表达变化第35页
        2.3.6 AOP-1 基因表达变化第35-36页
        2.3.7 过氧化还原酶6基因表达变化第36-37页
        2.3.8 蛋白表达分析第37页
    3.4 小结第37-39页
第3章 MT2A与β -domain过表达对细胞增殖和细胞色素氧化酶的影响第39-53页
    3.1 材料和方法第39-40页
        3.1.1 菌株与细胞第39页
        3.1.2 基因组来源第39页
        3.1.3 实验试剂与器材第39页
        3.1.4 主要试剂配制第39-40页
    3.2 金属硫蛋白基因MT-2A获得第40-44页
        3.2.1 基因组获取第40页
        3.2.2 MT2A基因克隆第40-42页
        3.2.3 载体转化与筛选、测序第42-44页
    3.3 pEGFP-MT2A表达质粒的构建第44-45页
    3.4 重组表达质粒pEGFP-MT2A的鉴定第45-46页
    3.5 β -domain过表达载体构建第46页
    3.6 细胞色素氧化酶基因第46-47页
    3.7 实时定量PCR引物第47-48页
    3.8 提取总RNA及获得cDNA第48页
    3.9 细胞色素c氧化酶 6B2表达分析第48页
    3.10 结果第48-51页
        3.10.1 MT2A基因克隆第48-50页
        3.10.2 MT2A和β -domain过表达细胞株繁殖变化第50页
        3.10.3 6B2亚基表达变化第50-51页
    3.11 小结第51-53页
第4章 讨论与结论第53-55页
第5章 综述 乳腺癌转移关联基因与金属硫蛋白基因第55-62页
    5.1 乳腺癌概况第55页
    5.2 乳腺癌转移相关基因的研究进展第55-59页
        5.2.1 基因组水平研究第55-57页
        5.2.2 蛋白组学研究第57-58页
        5.2.3 细胞膜转移蛋白质第58页
        5.2.4 分泌蛋白研究第58-59页
    5.3 金属硫蛋白MT第59-62页
参考文献第62-67页
结论第67-68页
附录A 乳腺癌细胞第68-69页
附录B 实时定量PCR运行结果分析第69-70页
致谢第70-71页
导师简介第71-72页
作者简介第72-73页
学位论文数据集第73页

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