| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 前言 | 第7-19页 |
| 1.1 植物柱头与花粉的结构与功能 | 第7-8页 |
| 1.2 植物亲和授粉过程影响因素和调控因子 | 第8-13页 |
| 1.3 花粉水合相关基因及脂类对育性的影响 | 第13-15页 |
| 1.4 绒毡层在外壁发育中的作用 | 第15-17页 |
| 1.5 同时涉及花药角质层和花粉外壁发育的基因 | 第17-18页 |
| 1.6 研究内容及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料和方法 | 第19-32页 |
| 2.1 材料试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植株 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 质粒 | 第19页 |
| 2.1.4 仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.5 抗生素、试剂(盒)以及服务 | 第20页 |
| 2.2 拟南芥的种植 | 第20-21页 |
| 2.3 亚历山大花粉活力染色 | 第21页 |
| 2.4 体外花粉萌发 | 第21-22页 |
| 2.5 花粉管(体内)苯胺蓝染色观察 | 第22页 |
| 2.6 人工授粉花粉水合情况实时观察 | 第22页 |
| 2.7 野生型花粉甲醛处理后助突变体花粉混合授粉 | 第22-23页 |
| 2.8 扫描电镜(SEM)观察花粉外壁结构 | 第23页 |
| 2.9 突变体育性恢复实验分析 | 第23页 |
| 2.9.1 高湿度(≥90%)处理 | 第23页 |
| 2.9.2 柱头人工施加外源脂类观察育性 | 第23页 |
| 2.10 透射电镜(TEM)观察 | 第23-24页 |
| 2.11 基因鉴定 | 第24-26页 |
| 2.11.1 植物组织总DNA提取 | 第24-25页 |
| 2.11.2 基因图位克隆粗定位和精细定位 | 第25页 |
| 2.11.3 PCR片段扩增 | 第25页 |
| 2.11.4 DNA片段胶回收 | 第25-26页 |
| 2.12 基因克隆与遗传互补植株 | 第26-29页 |
| 2.12.1 植物总RNA提取 | 第26页 |
| 2.12.2 RNA反转录 | 第26-27页 |
| 2.12.3 PCR片段扩增与pEasy-BluntSimple载体连接 | 第27页 |
| 2.12.4 菌落PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.12.5 大肠杆菌质粒提取 | 第27-28页 |
| 2.12.6 双酶切鉴定构建载体 | 第28页 |
| 2.12.7 目的片段与终载连接 | 第28页 |
| 2.12.8 农杆菌感受态制备与转化 | 第28-29页 |
| 2.12.9 转化植株及筛苗鉴定 | 第29页 |
| 2.13 烟草瞬转 | 第29-30页 |
| 2.14 相关引物序列及用途 | 第30-32页 |
| 第3章 结果 | 第32-47页 |
| 3.1 突变体的筛选与表型初步分析 | 第32-34页 |
| 3.1.1 突变体植株高度不育 | 第32-33页 |
| 3.1.2 突变体茎表皮蜡质缺失、部分花器官融合 | 第33-34页 |
| 3.2 突变体基因定位 | 第34-36页 |
| 3.2.1 该突变体无T-DNA插入 | 第34-35页 |
| 3.2.2 突变体基因的图位克隆(基因粗定位) | 第35页 |
| 3.2.3 基因精细定位和突变体基因的分析 | 第35-36页 |
| 3.3 缺失基因的功能预测分析 | 第36-44页 |
| 3.3.1 初步确定为雄性不育突变体 | 第36-37页 |
| 3.3.2 花粉活力正常、细胞核无异常 | 第37-38页 |
| 3.3.3 花粉粒外壁结构完整、花药药室发育正常 | 第38-39页 |
| 3.3.4 突变体花粉可在体外萌发 | 第39页 |
| 3.3.5 突变体花粉无法在柱头萌发 | 第39-40页 |
| 3.3.6 突变体花粉无法在柱头水合 | 第40-42页 |
| 3.3.7 突变体花粉发育绒毡层中脂类物质发育异常 | 第42-43页 |
| 3.3.8 突变体茎表和柱头表面蜡质缺失 | 第43-44页 |
| 3.4 遗传互补CER3基因,突变体育性恢复 | 第44页 |
| 3.5 CER3表达模式及亚细胞定位分析 | 第44-47页 |
| 第4章 讨论 | 第47-51页 |
| 4.1 该突变体是水合障碍型条件性雄性不育突变体 | 第47页 |
| 4.2 CER3可能参与合成花粉水合识别的脂类物质 | 第47-49页 |
| 4.3 植物花粉表面与茎杆表皮蜡质的转运或合成 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第56页 |
