| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 第一部分 Tim-3 融合蛋白的制备 | 第17-27页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 材料和设备 | 第17-18页 |
| 1.2.1 试剂 | 第17页 |
| 1.2.2 设备 | 第17-18页 |
| 1.3 方法 | 第18-22页 |
| 1.3.1 构建人Tim3 p ET28a(+)重组载体 | 第18-19页 |
| 1.3.2 转化 | 第19页 |
| 1.3.3 纯化蛋白 | 第19-21页 |
| 1.3.4 去除蛋白中的内毒素 | 第21页 |
| 1.3.5 蛋白定量（按照BCA蛋白定量试剂盒操作） | 第21页 |
| 1.3.6 检测内毒素 | 第21-22页 |
| 1.4 结果 | 第22-24页 |
| 1.4.1 小鼠Tim3Trx融合蛋白验证 | 第22页 |
| 1.4.2 人Tim3Fc融合蛋白鉴定 | 第22-24页 |
| 小结 | 第24页 |
| 1.5 讨论 | 第24-27页 |
| 第二部分 人鼠Tim-3 融合蛋白的交叉反应活性及Tim-3 融合蛋白活性的体外评价 | 第27-35页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料和设备 | 第27-28页 |
| 2.2.1 试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 设备 | 第27页 |
| 2.2.3 细胞 | 第27-28页 |
| 2.3 方法 | 第28-30页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第28页 |
| 2.3.2 细胞的冻存 | 第28页 |
| 2.3.3 ELISA检测 | 第28-29页 |
| 2.3.4 分离外周血中单个核细胞 | 第29页 |
| 2.3.5 RNA提取 | 第29页 |
| 2.3.6 反转录 | 第29页 |
| 2.3.7 荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.3.8 引物序列 | 第30页 |
| 2.3.9 统计分析 | 第30页 |
| 2.4 结果 | 第30-33页 |
| 2.4.1 融合蛋白的阻断活性 | 第30-31页 |
| 2.4.2 人、鼠Tim-3 融合蛋白的交叉反应活性 | 第31页 |
| 2.4.3 Tim-3 融合蛋白活性的体外评价 | 第31-32页 |
| 小结 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-35页 |
| 第三部分 Tim-3 在小鼠PQ模型中的作用及机制 | 第35-43页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料和设备 | 第35-36页 |
| 3.2.1 动物 | 第35-36页 |
| 3.2.2 试剂 | 第36页 |
| 3.2.3 设备 | 第36页 |
| 3.3 方法 | 第36-37页 |
| 3.3.1 建立Tim-3 过表达的转基因小鼠的PQ模型 | 第36页 |
| 3.3.2 建立Tim-3 阻断的PQ模型 | 第36页 |
| 3.3.3 引物序列 | 第36-37页 |
| 3.3.4 统计分析 | 第37页 |
| 3.4 结果 | 第37-40页 |
| 3.4.1 在Tim-3 转基因小鼠中，PQ中毒所引发的症状及炎症损伤减轻 | 第37-39页 |
| 3.4.2 阻断Tim-3 通路加重PQ中毒小鼠的症状 | 第39-40页 |
| 小结 | 第40页 |
| 3.5 讨论 | 第40-43页 |
| 第四部分 Tim-3 融合蛋白在小鼠移植瘤模型中的作用及机制 | 第43-51页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 材料和设备 | 第43-44页 |
| 4.2.1 动物及细胞 | 第43页 |
| 4.2.2 试剂 | 第43-44页 |
| 4.2.3 设备 | 第44页 |
| 4.3 方法 | 第44-46页 |
| 4.3.1 CT26细胞培养 | 第44页 |
| 4.3.2 麻醉药的配置 | 第44页 |
| 4.3.3 建立小鼠荷瘤模型并使用融合蛋白干预 | 第44页 |
| 4.3.4 分离小鼠脾脏中细胞 | 第44页 |
| 4.3.5 分离小鼠肿瘤浸润单个核细胞 | 第44-45页 |
| 4.3.6 引物序列 | 第45页 |
| 4.3.7 流式细胞术（FACS） | 第45-46页 |
| 4.3.8 统计分析 | 第46页 |
| 4.4 结果 | 第46-48页 |
| 4.4.1 阻断Tim-3 信号通路后肿瘤生长受到抑制 | 第46-47页 |
| 4.4.2 阻断Tim-3 信号通路影响移植瘤小鼠机制的初步探讨 | 第47-48页 |
| 小结 | 第48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-51页 |
| 第五部分 Tim-3 融合蛋白干预天然免疫机制的初步探讨 | 第51-57页 |
| 5.1 引言 | 第51页 |
| 5.2 材料和设备 | 第51页 |
| 5.2.1 试剂 | 第51页 |
| 5.2.2 设备 | 第51页 |
| 5.2.3 细胞 | 第51页 |
| 5.3 方法 | 第51-53页 |
| 5.3.1 建立CAC小鼠模型 | 第51-52页 |
| 5.3.2 小鼠结直肠巨噬细胞的分离 | 第52页 |
| 5.3.3 Western blot | 第52-53页 |
| 5.3.4 引物序列 | 第53页 |
| 5.3.5 统计分析 | 第53页 |
| 5.4 结果 | 第53-55页 |
| 5.4.1 肠癌中巨噬细胞Stat1的磷酸化受抑制 | 第53页 |
| 5.4.2 增强Tim-3 通路后进一步肠癌中巨噬细胞Stat1的磷酸化 | 第53-54页 |
| 5.4.3 Tim-3 与KDM6a | 第54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 5.5 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 综述 | 第61-73页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 硕士期间获得成果 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
