| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一篇 金黄色葡萄球菌RsmA蛋白的初步晶体学研究 | 第12-58页 |
| 第一章：研究背景概述 | 第12-22页 |
| 1.1 基本背景知识简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 核糖体RNA(rRNA),核糖体,以及蛋白质翻译 | 第13-15页 |
| 1.2 rRNA的甲基化修饰及甲基转移酶简介 | 第15-20页 |
| 1.2.1 rRNA的甲基化及16S rRNA的甲基化修饰 | 第15-17页 |
| 1.2.2 SAM依赖的甲基化酶超家族 | 第17-18页 |
| 1.2.3 RsmA蛋白介绍及研究现状 | 第18-20页 |
| 1.3 研究目的与研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第22-34页 |
| 2.1 金黄色葡萄球菌RsmA的基因克隆及重组质粒的构建 | 第22-27页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.1.2 PCR反应及产物回收 | 第23-25页 |
| 2.1.3 酶切反应与链接 | 第25-26页 |
| 2.1.4 重组质粒的转化 | 第26页 |
| 2.1.5 阳性克隆的筛选鉴定及质粒的抽提 | 第26-27页 |
| 2.2 RsmA的表达纯化及结晶 | 第27-32页 |
| 2.2.1 RsmA蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.2.2 RsmA蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 RsmA蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 SeMet-RsmA蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 截短的RsmA蛋白的表达纯化 | 第31页 |
| 2.2.6 RsmA蛋白的晶体生长 | 第31页 |
| 2.2.7 RsmA蛋白的衍射数据收集 | 第31-32页 |
| 2.2.8 RsmA蛋白衍射数据的处理 | 第32页 |
| 2.3 体外实验 | 第32页 |
| 2.4 RsmA蛋白与底物的共结晶 | 第32-34页 |
| 2.4.1 RsmA蛋白与腺嘌呤共结晶 | 第32页 |
| 2.4.2 RsmA蛋白与SAM/SAH的共结晶 | 第32-34页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第34-50页 |
| 3.1 RsmA基因的克隆及质粒构建 | 第34-35页 |
| 3.2 RsmA及其截短蛋白的表达纯化 | 第35-38页 |
| 3.2.1 RsmA蛋白Ni~(2+)柱亲和层析结果 | 第35-36页 |
| 3.2.2 RsmA蛋白的凝胶层析结果 | 第36-37页 |
| 3.2.3 SeMet-RsmA蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 3.3 RsmA蛋白的晶体生长 | 第38-50页 |
| 3.3.1 RsmA native蛋白的晶体初筛 | 第38-40页 |
| 3.3.2 SeMet-RsmA蛋白的晶体生长 | 第40页 |
| 3.3.3 RsmA蛋白的数据收集与处理 | 第40-43页 |
| 3.3.4 RsmA蛋白与底物的共结晶 | 第43-46页 |
| 3.3.5 截短的RsmA蛋白的表达纯化 | 第46-50页 |
| 本篇小结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 第二篇 酿酒酵母中的ISW2染色体重塑复合物的结构探索 | 第58-94页 |
| 第一章 研究背景简介 | 第58-68页 |
| 1.1 真核生物的染色质与核小体简介 | 第58页 |
| 1.2 真核生物基因转录与染色体重塑 | 第58-59页 |
| 1.3 ATP依赖的染色体重塑复合物 | 第59-61页 |
| 1.4 ISWI染色体重塑复合物以及酿酒酵母中的ISWI染色体重塑复合物 | 第61-63页 |
| 1.5 酿酒酵母中ISW2复合物 | 第63-66页 |
| 1.6 研究意义 | 第66-68页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第68-74页 |
| 2.1 相关蛋白的基因克隆及质粒的构建 | 第68-70页 |
| 2.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第70-71页 |
| 2.2.1 Isw2的表达纯化 | 第70页 |
| 2.2.2 Dpb4和Dls1蛋白的表达纯化 | 第70-71页 |
| 2.2.3 Itc1蛋白及截短片段的表达 | 第71页 |
| 2.3 ISW2复合物native蛋白的晶体生长 | 第71页 |
| 2.4 Isw2、Dpb4+Dls1与DNA结合的ESMA实验 | 第71-72页 |
| 2.5 Isw2与Dbp4+Dls1相互作用探究 | 第72页 |
| 2.6 Isw2,Dpb4+Dls1与dsDNA的共结晶 | 第72-73页 |
| 2.7 晶体的衍射数据收集 | 第73-74页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第74-86页 |
| 3.1 ISW2复合物蛋白及其片段的基因克隆及重组质粒的构建 | 第74页 |
| 3.2 重组蛋白的纯化 | 第74-78页 |
| 3.2.1 Isw2蛋白的表达纯化 | 第74-76页 |
| 3.2.2 Dpb4+Dls1蛋白的表达纯化 | 第76-78页 |
| 3.3 重组native蛋白的晶体生长及衍射 | 第78-79页 |
| 3.4 重组蛋白与DNA结合的ESMA实验 | 第79-81页 |
| 3.5 重组蛋白与DNA的共结晶 | 第81-83页 |
| 3.6 Isw2与Dpb4+Dls1相互作用的探究 | 第83-86页 |
| 本篇小结 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 附录 | 第94-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102页 |
