| 摘要 | 第5-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第18-19页 |
| 前言 | 第19-23页 |
| 第一章 去苏素化修饰对SCA3/MJD转基因果蝇模型表型的影响及其可能机制研究 | 第23-63页 |
| 1.1 仪器、材料和试剂 | 第24-31页 |
| 1.1.1 主要仪器及耗材 | 第24-26页 |
| 1.1.2 果蝇培养用材料 | 第26页 |
| 1.1.3 试剂 | 第26-28页 |
| 1.1.4 果蝇品种 | 第28页 |
| 1.1.5 主要试剂的配制 | 第28-31页 |
| 1.2 方法 | 第31-47页 |
| 1.2.1 构建转基因果蝇质粒 | 第31-37页 |
| 1.2.1.1 重组质粒pMD-SCA3-Q27、pMD-SCA3-Q84质粒的构建 | 第31-35页 |
| 1.2.1.2 定点突变,构建pMD-SCA3-Q27-K166R、pMD-SCA3-Q84-K166R质粒 | 第35-36页 |
| 1.2.1.3 转基因果蝇质粒的构建 | 第36-37页 |
| 1.2.2 果蝇胚胎的显微注射 | 第37-38页 |
| 1.2.2.1 葡萄汁平板的制备 | 第37页 |
| 1.2.2.2 准备DNA | 第37页 |
| 1.2.2.3 果蝇胚胎的准备及显微注射 | 第37-38页 |
| 1.2.3 转基因果蝇的筛选,平衡及染色体定位 | 第38-39页 |
| 1.2.4 转基因果蝇的鉴定 | 第39-40页 |
| 1.2.4.1 在全身表达ataxin-3转基因果蝇杂交方案 | 第39页 |
| 1.2.4.2 RNA的提取 | 第39-40页 |
| 1.2.4.3 逆转录 | 第40页 |
| 1.2.4.4 Real-time PCR | 第40页 |
| 1.2.5 处女蝇的收集 | 第40-41页 |
| 1.2.6 雌雄果蝇的杂交方案 | 第41页 |
| 1.2.7 果蝇表型的观察 | 第41-43页 |
| 1.2.7.1 复眼表型 | 第41-42页 |
| 1.2.7.2 孵化率 | 第42页 |
| 1.2.7.3 雌雄比例、翅膀发育异常比例 | 第42页 |
| 1.2.7.4 寿命 | 第42页 |
| 1.2.7.5 果蝇爬行实验 | 第42-43页 |
| 1.2.8 ataxin-3蛋白水平的检测 | 第43-45页 |
| 1.2.8.1 提取蛋白 | 第43页 |
| 1.2.8.2 Western blot检测ataxin-3蛋白的水平 | 第43-45页 |
| 1.2.9 Smt3蛋白水平的检测 | 第45-47页 |
| 1.2.9.1 提取蛋白 | 第45页 |
| 1.2.9.2 Western blot检测Smt3蛋白水平 | 第45-47页 |
| 1.3 结果 | 第47-59页 |
| 1.3.1 转基因果蝇质粒的构建 | 第47-49页 |
| 1.3.2 转基因果蝇筛选和染色体定位 | 第49页 |
| 1.3.3 转基因果蝇的鉴定 | 第49-51页 |
| 1.3.4 SCA3/MJD转基因果蝇表型的观察 | 第51-57页 |
| 1.3.4.1 SCA3/MJD转基因果蝇复眼表型 | 第51-52页 |
| 1.3.4.2 SCA3/MJD转基因果蝇寿命 | 第52-53页 |
| 1.3.4.3 SCA3/MJD转基因果蝇孵化率、性别比例 | 第53-55页 |
| 1.3.4.4 SCA3/MJD转基因果蝇翅膀异常比例 | 第55-56页 |
| 1.3.4.5 SCA3/MJD转基因果蝇爬行速度 | 第56-57页 |
| 1.3.5 ataxin-3蛋白水平的检测 | 第57-58页 |
| 1.3.6 Smt3蛋白水平的检测 | 第58-59页 |
| 1.4 讨论 | 第59-62页 |
| 1.5 结论 | 第62-63页 |
| 第二章 下调SUMOylation通路对SCA3/MJD转基因果蝇模型表型的影响及可能机制研究 | 第63-86页 |
| 2.1 仪器、材料和试剂 | 第63-67页 |
| 2.1.1 主要仪器及耗材 | 第63-64页 |
| 2.1.2 果蝇培养用材料 | 第64页 |
| 2.1.3 试剂 | 第64页 |
| 2.1.4 果蝇 | 第64-65页 |
| 2.1.5 试剂的配制 | 第65-67页 |
| 2.2 研究方法 | 第67-75页 |
| 2.2.1 SCA3/MJD转基因果蝇模型中,Smt3表达水平的检测 | 第67-70页 |
| 2.2.2 在复眼中表达扩展突变型ataxin-3-Q78果蝇的获得 | 第70页 |
| 2.2.3 在神经系统表达扩展突变型ataxin-3-Q78果蝇的获得 | 第70-71页 |
| 2.2.4 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇表型的影响 | 第71-73页 |
| 2.2.4.1 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇复眼的影响 | 第71页 |
| 2.2.4.2 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇寿命的影响 | 第71页 |
| 2.2.4.3 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇爬行能力影响 | 第71-72页 |
| 2.2.4.4 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇孵化率的影响 | 第72页 |
| 2.2.4.5 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇雌雄比例、翅膀发育异常比例的影响 | 第72-73页 |
| 2.2.5 下调SUMOylation通路对polyQ扩展突变型SCA3/MJD转基因果蝇模型ataxin-3水平的影响 | 第73-75页 |
| 2.2.5.1 提取蛋白 | 第73页 |
| 2.2.5.2 Western blot检测ataxin-3蛋白的水平 | 第73-75页 |
| 2.3 研究结果 | 第75-83页 |
| 2.3.1 SCA3/MJD转基因果蝇模型中,Smt3水平的检测 | 第75-76页 |
| 2.3.2 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇表型的影响 | 第76-82页 |
| 2.3.2.1 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇复眼的影响 | 第76-78页 |
| 2.3.2.2 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇寿命的影响 | 第78-79页 |
| 2.3.2.3 下调SUMOylation通路,对SCA3/MJD转基因果蝇爬行能力影响 | 第79-80页 |
| 2.3.2.4 下调SUMOylation通路对SCA3/MJD转基因果蝇孵化率、雌雄比例、翅膀发育异常的影响 | 第80-82页 |
| 2.3.4 下调SUMOylation通路对ataxin-3蛋白水平的影响 | 第82-83页 |
| 2.4 讨论 | 第83-85页 |
| 2.5 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 综述 | 第95-112页 |
| Reference | 第104-112页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
