| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.2 水稻种子耐储藏性研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 影响水稻种子储藏性的主要因素 | 第10页 |
| 1.2.2 水稻耐储藏性评价标准 | 第10-11页 |
| 1.2.3 水稻耐储藏性研究方法 | 第11页 |
| 1.2.4 种子储藏方式 | 第11页 |
| 1.2.5 耐储藏性机理研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 脂肪氧化酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.1 脂肪氧化酶功能 | 第12页 |
| 1.3.2 LOX3与稻谷耐储性关系 | 第12-13页 |
| 1.4 蛋白互作的主要研究技术 | 第13-15页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术 | 第13-14页 |
| 1.4.2 GST pull-down技术 | 第14-15页 |
| 1.5 蛋白质组学研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5.1 蛋白质组学简介 | 第15页 |
| 1.5.2 蛋白质组学在水稻中的应用 | 第15-16页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 酵母双杂交系统筛选LOX3互作蛋白 | 第17-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.5 主要培养基及缓冲液配方 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 目的基因的获得 | 第19-20页 |
| 2.2.2 pGDKT7-LOX3载体的构建 | 第20-24页 |
| 2.2.3 自激活及毒性检验 | 第24-25页 |
| 2.2.4 酵母双杂交文库筛选 | 第25页 |
| 2.2.5 提取酵母质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.6 PCR扩增及测序分析 | 第26页 |
| 2.2.7 AD载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.7.1 AD载体引物设计 | 第26页 |
| 2.2.7.2 AD载体CDs序列扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.8 AD/BD载体共转化 | 第27页 |
| 2.2.9 文库筛选结果验证 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.3.1 目的基因克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.2 目的基因与载体连接 | 第29-30页 |
| 2.3.3 pGBKT7-LOX3自激活验证 | 第30-31页 |
| 2.3.4 酵母双杂交文库筛选 | 第31-33页 |
| 2.3.5 AD载体构建 | 第33-35页 |
| 2.3.6 文库筛选结果验证 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 利用GST-pull down技术验证互作蛋白 | 第37-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 载体与菌株 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂及配方 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 3.2.2 原核表达载体构建 | 第39页 |
| 3.2.3 目的蛋白的小量表达 | 第39-40页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE分析 | 第40页 |
| 3.2.5 目的蛋白的大量表达及可溶液分析 | 第40页 |
| 3.2.6 空载体的诱导表达 | 第40页 |
| 3.2.7 GST pull-down实验 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 原核表达载体构建 | 第41-44页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 蛋白质组学结果分析与验证 | 第46-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 代谢通路分析 | 第46-47页 |
| 4.2.2 种子的老化处理 | 第47页 |
| 4.2.3 水稻种胚RNA的提取及反转录 | 第47页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR的引物设计 | 第47页 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR | 第47-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.3.1 代谢通路分析 | 第48-49页 |
| 4.3.2 水稻种胚RNA鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 实时荧光定量PCR分析 | 第50-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |