| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 养殖场大肠杆菌和葡萄球菌的耐药及流行现状 | 第14-16页 |
| 2 兽用抗菌药物的使用现状 | 第16-18页 |
| 3 细菌对抗菌药的耐药机制 | 第18-20页 |
| 3.1 产生灭活酶 | 第18页 |
| 3.2 抗菌药物作用靶位改变 | 第18-19页 |
| 3.3 改变细菌外膜通透性 | 第19页 |
| 3.4 影响主动流出系统 | 第19页 |
| 3.5 改变代谢途径 | 第19-20页 |
| 4 部分质粒介导的耐药基因的耐药机制 | 第20-22页 |
| 4.1 磷霉素耐药基因 | 第20-21页 |
| 4.2 碳青霉烯类耐药基因 | 第21页 |
| 4.3 多粘菌素耐药基因 | 第21-22页 |
| 5 环境中抗生素耐药基因与人类健康的关系 | 第22-23页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 猪场质粒介导的大肠杆菌和葡萄球菌的耐药基因检测及耐药性分析 | 第25-47页 |
| 1 材料 | 第25-27页 |
| 1.1 样品来源 | 第25页 |
| 1.2 试验菌株 | 第25页 |
| 1.3 试验药物 | 第25-26页 |
| 1.4 主要试剂 | 第26页 |
| 1.5 仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2 试验方法 | 第27-36页 |
| 2.1 样品采集 | 第27页 |
| 2.2 细菌分离与鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.1 细菌分离 | 第27-28页 |
| 2.2.2 细菌鉴定 | 第28页 |
| 2.2.3 细菌保存 | 第28页 |
| 2.3 体外抑菌活性检测 | 第28-31页 |
| 2.3.1 抗菌药的配制 | 第28-30页 |
| 2.3.2 菌液制备 | 第30-31页 |
| 2.3.3 抗菌药应用液制备 | 第31页 |
| 2.3.4 含药平板制备 | 第31页 |
| 2.3.5 结果判定 | 第31页 |
| 2.4 质粒介导的磷霉素类耐药基因的检测 | 第31-33页 |
| 2.4.1 细菌模板DNA的制备 | 第31页 |
| 2.4.2 引物设计及合成 | 第31-32页 |
| 2.4.3 PCR扩增耐药基因 | 第32-33页 |
| 2.4.3.1 扩增反应体系 | 第32页 |
| 2.4.3.2 扩增反应条件 | 第32-33页 |
| 2.5 质粒介导的碳青霉烯类耐药基因的检测 | 第33-34页 |
| 2.5.1 细菌模板DNA的制备 | 第33页 |
| 2.5.2 引物设计及合成 | 第33页 |
| 2.5.3 PCR扩增耐药基因 | 第33-34页 |
| 2.5.3.1 扩增反应体系 | 第33页 |
| 2.5.3.2 扩增反应条件 | 第33-34页 |
| 2.6 质粒介导的多粘菌素耐药基因mcr-1的检测 | 第34-36页 |
| 2.6.1 细菌模板DNA的制备 | 第34-35页 |
| 2.6.2 引物设计及合成 | 第35页 |
| 2.6.3 PCR扩增耐药基因 | 第35-36页 |
| 2.6.3.1 扩增反应体系 | 第35页 |
| 2.6.3.2 扩增反应条件 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-44页 |
| 3.1 样品采集结果 | 第36-37页 |
| 3.2 细菌分离鉴定结果 | 第37页 |
| 3.3 体外抑菌活性检测结果 | 第37-41页 |
| 3.4 质粒介导的磷霉素类耐药基因的检测结果 | 第41页 |
| 3.5 质粒介导的碳青霉烯类耐药基因的检测结果 | 第41-42页 |
| 3.6 质粒介导的多粘菌素耐药基因mcr-1的检测结果 | 第42-43页 |
| 3.7 耐药基因型和耐药表型分析 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 质粒介导的大肠杆菌mcr-1耐药基因的接合试验 | 第47-53页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1 试验菌株 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第47-48页 |
| 2 试验方法 | 第48-49页 |
| 2.1 接合试验 | 第48-49页 |
| 2.1.1 含药平板制备 | 第48页 |
| 2.1.2 接合子试验 | 第48-49页 |
| 2.2 疑似接合子的鉴定 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 3.1 阳性菌的接合试验结果 | 第49页 |
| 3.2 mcr-1阳性接合子的基因扩增结果 | 第49-51页 |
| 3.3 接合子及原菌株的MIC比较 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 mcr-1阳性菌株的MLST分型 | 第53-60页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 试验菌株 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第53-54页 |
| 2 试验方法 | 第54-57页 |
| 2.1 七对管家基因的检测 | 第54-55页 |
| 2.1.1 菌液制备 | 第54页 |
| 2.1.2 DNA模板提取 | 第54页 |
| 2.1.3 引物设计及合成 | 第54页 |
| 2.1.4 PCR扩增管家基因 | 第54-55页 |
| 2.1.4.1 扩增反应体系 | 第54-55页 |
| 2.1.4.2 扩增反应条件 | 第55页 |
| 2.2 菌株进化关系分析 | 第55-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-58页 |
| 3.1 管家基因检测结果 | 第57页 |
| 3.2 MLST分型结果 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 在读期间发表文章 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
