| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-27页 |
| 第一章 白色脂肪细胞的形成 | 第12-18页 |
| 1.1 从 MSCs 到 preadipocytes | 第13-14页 |
| 1.1.1 Wnt 信号通路在成脂定向中的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.2 Bone morphogenetic proteins (BMP) 信号通路在成脂定向中的作用 | 第14页 |
| 1.2 Preadipocytes 的成熟过程 | 第14-18页 |
| 1.2.1 初级生长阻滞（Initial growth arrest）和次级生长阻滞（Permenant growth arrest） | 第14-15页 |
| 1.2.2 C/EBPβ促进细胞从初级生长阻滞向克隆增殖的转化 | 第15页 |
| 1.2.3 成脂诱导剂导致 preadipocytes 分化关键转录因子的有序表达 | 第15-18页 |
| 第二章 成脂相关 microRNA 研究进展 | 第18-23页 |
| 2.1 MicroRNA 的生成 | 第18-19页 |
| 2.2 MiRNA 对靶基因的调控 | 第19-20页 |
| 2.3 参与成脂过程以及脂肪细胞代谢的 miRNA | 第20-23页 |
| 2.3.1 促进成脂的 miRNA | 第20-21页 |
| 2.3.2 抑制成脂的 miRNA | 第21页 |
| 2.3.3 参与脂肪细胞代谢的 miRNA | 第21-23页 |
| 第三章 MiR-199a-5p 研究现状 | 第23-27页 |
| 3.1 MiR-199a-5p 的生成以及表达调控 | 第23-24页 |
| 3.2 MiR-199a-5p 的生物学功能 | 第24-25页 |
| 3.3 本研究的假设和实验目标 | 第25-27页 |
| 实验研究 | 第27-46页 |
| 第四章 猪 miR-199-5p 组织表达及其在脂肪细胞分化中的时序表达模式研究 | 第27-31页 |
| 4.1 材料 | 第27页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第27页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 4.2 方法 | 第27-28页 |
| 4.2.1 组织表达谱样品的采集 | 第27页 |
| 4.2.2 组织总 RNA 的提取 | 第27页 |
| 4.2.3 猪 preadipocytes 的分离和成脂诱导分化 | 第27页 |
| 4.2.4 细胞总 RNA 的提取 | 第27页 |
| 4.2.5 MiR-199a-5p 和 U6 RNA 的特异反转录 PCR | 第27-28页 |
| 4.2.6 Real-time qPCR 检测 miR-199a-5p 表达量 | 第28页 |
| 4.2.7 油红 O 染色 | 第28页 |
| 4.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 4.3.1 成年关中黑猪 miR-199a-5p 组织表达谱 | 第28页 |
| 4.3.2 猪原代 preadipocytes 体外培养和成脂分化体系的建立 | 第28-29页 |
| 4.3.3 猪原代 preadipocytes 体外成脂分化过程中 miR-199a-5p 表达模式 | 第29-30页 |
| 4.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第五章 MiR-199a-5p 在猪脂肪细胞中的作用研究 | 第31-38页 |
| 5.1 材料 | 第31页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第31页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 5.2 方法 | 第31-33页 |
| 5.2.1 猪原代 preadipocytes 的分离培养和成脂诱导分化 | 第31页 |
| 5.2.2 MiR-199a-5p Agomir 和 NC 转染猪 preadipocytes | 第31-32页 |
| 5.2.3 细胞总 RNA 的提取 | 第32页 |
| 5.2.4 MiR-199a-5p 和 U6 RNA 的特异反转录 PCR | 第32页 |
| 5.2.5 Real-time qPCR 检测 miR-199a-5p 表达量 | 第32页 |
| 5.2.6 细胞总 RNA 反转录 PCR | 第32页 |
| 5.2.7 Real-time qPCR 检测成脂标志基因的表达量 | 第32页 |
| 5.2.8 细胞总蛋白的提取 | 第32页 |
| 5.2.9 Western Blot 技术检测成脂标志基因的表达量 | 第32页 |
| 5.2.10 油红 O 染色（提取） | 第32-33页 |
| 5.2.11 流式细胞术检测细胞周期 | 第33页 |
| 5.3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 5.3.1 MiR-199a-5p Agomir 转染超表达效率检测 | 第33页 |
| 5.3.2 MiR-199a-5p 超表达对脂肪细胞分化过程中成脂标志基因的影响 | 第33-34页 |
| 5.3.3 MiR-199a-5p 超表达对脂肪细胞分化过程中脂质积累的影响 | 第34页 |
| 5.3.4 MiR-199a-5p 超表达可抑制猪 preadipocytes 的增殖 | 第34-35页 |
| 5.3.5 MiR-199a-5p 超表达可影响猪 preadipocytes 的细胞周期 | 第35-36页 |
| 5.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第六章 MiR-199a-5p 在猪脂肪细胞中的靶基因验证 | 第38-46页 |
| 6.1 材料 | 第38页 |
| 6.2 方法 | 第38-39页 |
| 6.2.1 猪原代 preadipocytes 的分离培养 | 第38页 |
| 6.2.2 MiR-199a-5p Agomir 和 NC 转染猪 preadipocytes | 第38页 |
| 6.2.3 细胞总 RNA 的提取 | 第38页 |
| 6.2.4 细胞总 RNA 反转录 PCR | 第38页 |
| 6.2.5 Real-time qPCR 检测 Cav-1 基因的表达量 | 第38-39页 |
| 6.2.6 细胞总蛋白的提取 | 第39页 |
| 6.2.7 Western Blot 技术检测 Cav-1 的表达量 | 第39页 |
| 6.2.8 Cav-1mRNA 3’UTR 部分片段的扩增 | 第39页 |
| 6.2.9 Cav-1mRNA 3’UTR 部分片段的酶切并连入 psiCHECKTM-2 载体 | 第39页 |
| 6.2.10 链接产物的鉴定和扩繁 | 第39页 |
| 6.2.11 荧光素酶报告基因分析 | 第39页 |
| 6.3 结果与分析 | 第39-44页 |
| 6.3.1 Cav-1 在猪 preadipocytes 分化和增殖过程中的时序表达模式 | 第39-40页 |
| 6.3.2 超表达 miR-199a-5p 可以下调 Cav-1 的表达量 | 第40-41页 |
| 6.3.3 构建连有 Cav-1 mRNA 3’UTR 片段的荧光素酶报告载体 | 第41-43页 |
| 6.3.4 荧光素酶报告分析 | 第43-44页 |
| 6.4 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 创新点 | 第47-48页 |
| 进一步研究内容 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 附录 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
