| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第11-27页 |
| 第一章 供体细胞的选择对体细胞核移植的影响 | 第11-20页 |
| 1.1 细胞分化程度的不同对核移植和重编程效率的影响 | 第11-13页 |
| 1.1.1 成体成纤维细胞和胎儿成纤维细胞的不同核移植效率 | 第11-12页 |
| 1.1.2 分化程度不同的其它细胞的重编程效率 | 第12-13页 |
| 1.2 与细胞的分化程度和传代活力相关的重要因素 | 第13-18页 |
| 1.2.1 DNA甲基化 | 第13-15页 |
| 1.2.2 端粒 | 第15-16页 |
| 1.2.3 凋亡基因和抗凋亡基因 | 第16-18页 |
| 1.2.4 多能性基因 | 第18页 |
| 1.3 小结 | 第18-20页 |
| 第二章 维生素C的研究进展 | 第20-27页 |
| 2.1 维生素C的简介 | 第20-21页 |
| 2.2 维生素C的主要功能 | 第21-23页 |
| 2.2.1 维生素C的抗氧化作用 | 第21-22页 |
| 2.2.2 维生素C和DNA的去甲基化 | 第22-23页 |
| 2.2.3 维生素C和癌症预防 | 第23页 |
| 2.3 维生素C的研究进展 | 第23-25页 |
| 2.4 维生素C的发展前景 | 第25页 |
| 2.5 小结 | 第25-27页 |
| 实验部分 | 第27-57页 |
| 第三章 影响牛成体成纤维细胞和胎儿成纤维细胞体外增殖活力原因分析 | 第27-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 仪器设备 | 第27-28页 |
| 3.1.2 耗材、试剂和配方 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 3.2.1 原代牛皮肤成纤维细胞的培养 | 第28-29页 |
| 3.2.2 细胞的传代和冻存 | 第29页 |
| 3.2.3 细胞生长曲线的绘制 | 第29页 |
| 3.2.4 细胞基因组的提取 | 第29-30页 |
| 3.2.5 细胞RNA的提取及其反转录 | 第30-31页 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR对胎儿成纤维细胞和成体成纤维细胞进行比较 | 第31-32页 |
| 3.2.7 实验数据的统计分析 | 第32-33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-38页 |
| 3.3.1 胎儿成纤维细胞和成体成纤维细胞的体外生长状态 | 第33-34页 |
| 3.3.2 胎儿成纤维细胞和成体成纤维细胞端粒长度的比较 | 第34-35页 |
| 3.3.3 凋亡基因在胎儿成纤维细胞和成体成纤维细胞中的表达 | 第35-36页 |
| 3.3.4 抗凋亡基因在胎儿成纤维细胞和成体成纤维细胞中的表达 | 第36-37页 |
| 3.3.5 多能性基因在胎儿成纤维细胞和成体成纤维细胞中的表达 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 Vc处理成体供体细胞对牛体细胞核移植早期胚胎发育的影响 | 第41-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 仪器设备 | 第41页 |
| 4.1.2 耗材、试剂和配方 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 4.2.1 供体细胞的准备及Vc处理 | 第42页 |
| 4.2.2 卵母细胞的收集和体外成熟(IVM) | 第42-43页 |
| 4.2.3 核移植、融合、激活和胚胎培养 | 第43页 |
| 4.2.4 体外受精(IVF) | 第43页 |
| 4.2.5 囊胚的凋亡检测 | 第43-44页 |
| 4.2.6 囊胚CDX2染色 | 第44页 |
| 4.2.7 供体成纤维细胞的5hmc染色 | 第44页 |
| 4.2.8 定量荧光强度 | 第44页 |
| 4.2.9 实时荧光定量PCR | 第44-45页 |
| 4.2.10 实验数据的统计分析 | 第45页 |
| 4.3 实验结果 | 第45-53页 |
| 4.3.1 Vc对牛成纤维细胞增殖和凋亡的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.2 Vc对供体细胞5hmc水平的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.3 Vc对体细胞中多能性基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.4 Vc处理对凋亡相关基因表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.5 Vc对克隆胚体外发育的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.6 Vc对克隆胚质量的影响(总细胞数、内细胞团数和滋养层细胞数) | 第50-51页 |
| 4.3.7 Vc对克隆胚凋亡率的影响 | 第51-53页 |
| 4.3.8 Vc对与体细胞核移植发育相关的几个重要基因表达的影响 | 第53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.5 小结 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
