| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 水平基因转移介导细菌耐药 | 第12-13页 |
| 1.1.1 细菌对抗生素耐药进展 | 第12页 |
| 1.1.2 水平基因转移是细菌耐药重要途径 | 第12-13页 |
| 1.2 基因岛是重要的移动元件 | 第13-16页 |
| 1.2.1 基因岛的结构与功能 | 第13-15页 |
| 1.2.2 GIsul2基因岛 | 第15-16页 |
| 1.3 ISCR2移动元件 | 第16-17页 |
| 1.4 基因岛的转移及调控机制 | 第17-21页 |
| 1.4.1 基因岛的转移机制 | 第17-19页 |
| 1.4.2 基因岛的调控机制 | 第19-21页 |
| 1.5 课题目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 P4-like整合酶和DRs介导三类元件的转移 | 第23-41页 |
| 2.1 引言 | 第23-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 实验菌株及质粒载体 | 第26页 |
| 2.2.2 实验试剂及仪器设备 | 第26-29页 |
| 2.2.2.1 实验主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 实验主要试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.2.3 实验试剂配置方法 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 细菌基因组的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PCR扩增目的片段 | 第30-32页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第32-33页 |
| 2.3.4 一步法无缝克隆 | 第33页 |
| 2.3.5 质粒提取 | 第33-35页 |
| 2.3.5.1 使用质粒快提试剂盒提取质粒 | 第34页 |
| 2.3.5.2 碱法手提质粒 | 第34-35页 |
| 2.3.6 DH5α化学感受态的制备 | 第35-36页 |
| 2.3.7 质粒的化学化转 | 第36页 |
| 2.3.8 酶切验证实验 | 第36-37页 |
| 2.3.9 钝化连接实验 | 第37页 |
| 2.3.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| 2.3.11 温敏质粒实验 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-41页 |
| 2.4.1 P4-like整合酶缺失导致转移事件消失 | 第38-39页 |
| 2.4.2 DR区缺失导致转移事件消失 | 第39-40页 |
| 2.4.3 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 FitA和Alpa调控GIsul2基因岛的转移 | 第41-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.1 实验菌株及质粒载体 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 3.2.1 PCR扩增目的片段 | 第41页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第41页 |
| 3.2.3 一步法无缝克隆 | 第41页 |
| 3.2.4 质粒提取 | 第41页 |
| 3.2.5 质粒化转实验 | 第41页 |
| 3.2.6 酶切验证实验 | 第41页 |
| 3.2.7 温敏质粒实验 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-46页 |
| 3.3.1 Alpa是GIsul2基因岛转移的调控因子 | 第42-43页 |
| 3.3.2 fitA是GIsul2基因岛转移的调控因子 | 第43-45页 |
| 3.3.3 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 最小单元的转移调控机制 | 第46-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.1 实验菌株及质粒载体 | 第46页 |
| 4.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 PCR扩增目的片段 | 第46页 |
| 4.2.2 琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第46页 |
| 4.2.3 一步法无缝克隆 | 第46页 |
| 4.2.4 质粒提取 | 第46页 |
| 4.2.5 质粒化转实验 | 第46页 |
| 4.2.6 酶切验证实验 | 第46页 |
| 4.2.7 温敏质粒实验 | 第46-47页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第47-52页 |
| 4.3.1 P4-like整合酶独立介导Mini单元的转移 | 第47-48页 |
| 4.3.2 附加序列对Mini单元转移方式的影响 | 第48-50页 |
| 4.3.3 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 P4-like整合酶体外功能研究 | 第52-58页 |
| 5.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 5.1.1 实验菌株及质粒载体 | 第52页 |
| 5.1.2 实验试剂及仪器设备 | 第52-53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 5.2.1 PCR扩增目的片段 | 第53页 |
| 5.2.2 琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第53页 |
| 5.2.3 一步法无缝克隆 | 第53页 |
| 5.2.4 质粒提取 | 第53页 |
| 5.2.5 质粒化转实验 | 第53页 |
| 5.2.6 目的蛋白的表达与纯化 | 第53-55页 |
| 5.2.6.1 目的蛋白表达与制备 | 第54页 |
| 5.2.6.2 His标签蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第55-58页 |
| 5.3.1 P4-like整合酶纯化结果 | 第55页 |
| 5.3.2 P4-like整合酶能够特异性结合DR区 | 第55-56页 |
| 5.3.3 P4-like整合酶具有解旋酶活性 | 第56-57页 |
| 5.3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 第六章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-75页 |
| 个人简介 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
