| 摘要 | 第17-19页 |
| ABSTRACT | 第19-20页 |
| 符号说明 | 第21-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-30页 |
| 1.1 盐害的作用机理 | 第22-23页 |
| 1.1.1 离子毒害 | 第22页 |
| 1.1.2 氧化胁迫 | 第22-23页 |
| 1.2 植物的耐盐性机制 | 第23-25页 |
| 1.2.1 渗透调节 | 第23页 |
| 1.2.2 光合途径的调节 | 第23-24页 |
| 1.2.3 抗氧化系统的调节 | 第24-25页 |
| 1.2.3.1 酶促清除系统 | 第24-25页 |
| 1.2.3.2 非酶促清除系统 | 第25页 |
| 1.2.4 离子稳态调节 | 第25页 |
| 1.3 钙信号在盐胁迫中的作用 | 第25-27页 |
| 1.3.1 钙离子信号 | 第25-26页 |
| 1.3.2 钙调素(CaM) | 第26页 |
| 1.3.3 钙依赖蛋白激酶(CDPK) | 第26-27页 |
| 1.3.4 Ca~(2+)-ATPase | 第27页 |
| 1.4 5-氨基乙酰丙酸的研究进展 | 第27-29页 |
| 1.4.1 5-氨基乙酰丙酸在植物体内的作用 | 第27-29页 |
| 1.4.1.1 谷氨酰-tRNA还原酶 | 第28页 |
| 1.4.1.2 谷氨酰-tRNA还原酶编码基因HEMA | 第28-29页 |
| 1.4.2 ALA在农业上的研究进展 | 第29页 |
| 1.4.3 ALA提高植物抗逆性 | 第29页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 钙离子及5-氨基乙酰丙酸对盐胁迫下花生的协同保护作用 | 第30-64页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-39页 |
| 2.1.1 实验材料与实验地点 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要生化试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 材料处理 | 第31-32页 |
| 2.1.4 花生叶片相对电导率的测定 | 第32页 |
| 2.1.5 花生叶片相对含水量的测定 | 第32-33页 |
| 2.1.6 花生叶片MDA含量的测定 | 第33页 |
| 2.1.7 花生叶片SOD的活性测定 | 第33页 |
| 2.1.8 花生叶片POD的活性测定 | 第33页 |
| 2.1.9 花生叶片CAT的活性测定 | 第33-34页 |
| 2.1.10 花生叶片APX的活性测定 | 第34页 |
| 2.1.11 花生叶片O_2~-和H_2O_2含量的测定 | 第34页 |
| 2.1.12 花生叶片可溶性蛋白含量的测定 | 第34页 |
| 2.1.13 花生叶片脯氨酸含量的测定 | 第34-35页 |
| 2.1.14 Ca~(2+)、CaM含量以及Ca~(2+)-ATPase、CDPK活性的测定 | 第35页 |
| 2.1.15 花生叶片叶绿素含量的测定 | 第35页 |
| 2.1.16 花生叶片ALA含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.1.17 叶绿素合成相关基因的Real-time PCR检测 | 第36-39页 |
| 2.1.17.1 提取花生叶片总RNA | 第36页 |
| 2.1.17.2 RNA样品的检测 | 第36-37页 |
| 2.1.17.3 RNA的反转录 | 第37页 |
| 2.1.17.4 Real-Time PCR | 第37-39页 |
| (1) 引物序列 | 第37-38页 |
| (2) Real-Time PCR反应体系 | 第38页 |
| (3) Real-Time PCR反应程序 | 第38-39页 |
| 2.2 结果与分析 | 第39-59页 |
| 2.2.1 ALA对盐胁迫下花生的缓解作用 | 第39-47页 |
| 2.2.1.1 ALA对盐胁迫下花生叶片抗氧化酶系统的影响 | 第39-40页 |
| 2.2.1.2 ALA对盐胁迫下花生叶片细胞膜损伤的影响 | 第40-41页 |
| 2.2.1.3 ALA对盐胁迫下花生叶片脯氨酸含量的影响 | 第41-42页 |
| 2.2.1.4 ALA对盐胁迫下花生叶片可溶性蛋白含量的影响 | 第42-43页 |
| 2.2.1.5 ALA对盐胁迫下花生叶片叶绿素含量的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.1.6 ALA对盐胁迫下花生叶片HEMA1表达水平的影响 | 第44-45页 |
| 2.2.1.7 ALA对盐胁迫下花生叶片CHLD、CHLH及FECH2基因表达水平的影响 | 第45-46页 |
| 2.2.1.8 ALA对盐胁迫下花生叶片CaM表达水平的影响 | 第46-47页 |
| 2.2.2 钙离子对盐胁迫下花生叶片叶绿素合成的影响 | 第47-50页 |
| 2.2.2.1 盐胁迫下,钙离子对花生幼苗叶片叶绿素含量的影响 | 第47-48页 |
| 2.2.2.2 盐胁迫下,钙离子对花生叶片叶绿素合成基因HEMA1和GSA表达水平的影响 | 第48-49页 |
| 2.2.2.3 盐胁迫下,钙离子对花生叶片叶绿素合成基因CHLH、CHLI和CHLH及FECH2表达水平的影响 | 第49-50页 |
| 2.2.3 钙离子介导了ALA诱导的对盐胁迫下花生的缓解作用 | 第50-59页 |
| 2.2.3.1 钙离子参与ALA诱导盐胁迫条件下花生叶片质膜过氧化物水平的降低 | 第50-51页 |
| 2.2.3.2 钙离子参与ALA诱导盐胁迫条件下花生叶片叶绿素含量的增加 | 第51页 |
| 2.2.3.3 钙离子和ALA协同调控,调节盐胁迫条件下花生叶片相对含水量的增加 | 第51-53页 |
| 2.2.3.4 钙离子参与ALA诱导盐胁迫条件下花生叶片抗氧化酶活性的增强 | 第53-55页 |
| 2.2.3.5 钙离子和ALA协同调节Ca~(2+)-ATPase活性 | 第55-56页 |
| 2.2.3.6 钙离子和ALA协同调节Ca~(2+)和CaM的含量 | 第56-58页 |
| 2.2.3.7 钙离子和ALA协同调节CDPK活性 | 第58-59页 |
| 2.2.3.8 钙离子及其抑制剂对盐胁迫下花生叶片中ALA含量的影响 | 第59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-64页 |
| 2.3.1 钙离子对盐胁迫下花生幼苗叶绿素的影响 | 第59-60页 |
| 2.3.2 钙离子对5-氨基乙酰丙酸诱导的花生幼苗耐盐性的影响 | 第60-64页 |
| 2.3.2.1 5-氨基乙酰丙酸对花生幼苗耐盐性的影响 | 第61-62页 |
| 2.3.2.2 钙离子对5-氨基乙酰丙酸缓解的花生耐盐性的影响 | 第62-64页 |
| 第三章 转AhHEMA1基因烟草的耐盐性分析 | 第64-84页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第64-70页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第64页 |
| 3.1.2 酶、质粒与生化试剂 | 第64-65页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第65页 |
| 3.1.4 培养基的配制 | 第65页 |
| 3.1.5 花生AhHEMA1基因的克隆 | 第65-66页 |
| 3.1.5.1 花生总RNA的提取 | 第65-66页 |
| 3.1.5.2 花生叶片RNA的反转录 | 第66页 |
| 3.1.5.3 AhHEMA1基因全长的获取 | 第66页 |
| 3.1.6 转化大肠杆菌 | 第66-68页 |
| 3.1.6.1 农杆菌感受态的制备 | 第66-67页 |
| 3.1.6.2 用冻融法转化LA4404农杆菌 | 第67页 |
| 3.1.6.3 重组农杆菌阳性鉴定 | 第67-68页 |
| 3.1.7 农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第68-69页 |
| 3.1.7.1 外植体的侵染和培养 | 第68页 |
| 3.1.7.2 生根培养及移栽 | 第68-69页 |
| 3.1.8 转基因烟草的分子生物学检测 | 第69页 |
| 3.1.8.1 烟草基因组DNA的提取 | 第69页 |
| 3.1.8.2 转基因植株的PCR检测 | 第69页 |
| 3.1.8.3 转基因烟草植株的RT-PCR检测 | 第69页 |
| 3.1.9 转基因烟草的抗盐性分析 | 第69-70页 |
| 3.1.9.1 烟草幼苗的盐胁迫处理 | 第69页 |
| 3.1.9.2 烟草叶绿素含量的测定 | 第69页 |
| 3.1.9.3 烟草相对电导率的测定 | 第69页 |
| 3.1.9.4 烟草叶片MDA含量的测定 | 第69-70页 |
| 3.1.9.5 烟草叶片O_2~-和H_2O_2的测定 | 第70页 |
| 3.1.9.6 烟草叶片SOD,POD,CAT,APX活性的测定 | 第70页 |
| 3.1.9.7 烟草叶片ALA含量的测定 | 第70页 |
| 3.2 结果与分析 | 第70-81页 |
| 3.2.1 花生AhHEMA1基因的获取及分析 | 第70-71页 |
| 3.2.2 花生AhHEMA1基因的生物信息学分析 | 第71-73页 |
| 3.2.2.1 AhHEMA1基因及其编码蛋白的一级结构分析 | 第71-72页 |
| 3.2.2.2 AhHEMA1蛋白序列比对分析和进化树的构建 | 第72-73页 |
| 3.2.3 盐胁迫处理下AhHEMA1基因的表达模式分析 | 第73-74页 |
| 3.2.4 AhHEMA1基因转化烟草 | 第74-77页 |
| 3.2.4.1 植物表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 3.2.4.2 转化农杆菌 | 第75页 |
| 3.2.4.3 叶盘法转化烟草 | 第75-76页 |
| 3.2.4.4 转基因烟草基因组DNA的PCR检测结果 | 第76页 |
| 3.2.4.5 转基因烟草的RT-PCR鉴定 | 第76-77页 |
| 3.2.5 转基因AhHEMA1烟草的耐盐性分析 | 第77-81页 |
| 3.2.5.1 盐胁迫对各株系转基因烟草叶绿素含量的影响 | 第77页 |
| 3.2.5.2 盐胁迫中各株系转基因烟草中ALA积累量的影响 | 第77-78页 |
| 3.2.5.3 盐胁迫对各株系转基因烟草叶片活性氧积累的影响 | 第78-79页 |
| 3.2.5.4 盐胁迫对各株系转基因烟草叶片质膜损伤的影响 | 第79-80页 |
| 3.2.5.5 盐胁迫对各株系抗氧化酶活性的影响 | 第80-81页 |
| 3.3 讨论 | 第81-84页 |
| 第四章 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第94页 |
