中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
缩略语 | 第10-11页 |
前言 | 第11-21页 |
研究现状、成果 | 第11-20页 |
研究目的、方法 | 第20-21页 |
一、PSMC3 N末端与Ago2蛋白相互作用 | 第21-37页 |
1.1 材料和方法 | 第21-30页 |
1.1.1 实验材料 | 第21-24页 |
1.1.2 实验方法 | 第24-30页 |
1.2 结果 | 第30-33页 |
1.2.1 利用酵母双杂交系统证实PSMC3的N末端与Ago2蛋白PIWI结构域相互作用 | 第30-31页 |
1.2.2 PSMC3 N末端卷曲螺旋结构域的预测 | 第31-32页 |
1.2.3 PSMC3通过N末端的卷曲螺旋结构域与内源性Ago2蛋白免疫共沉淀 | 第32-33页 |
1.3 讨论 | 第33-36页 |
1.4 小结 | 第36-37页 |
二、PSMC3保护Ago2防止蛋白酶体降解 | 第37-61页 |
2.1 材料和方法 | 第37-48页 |
2.1.1 实验材料 | 第37-39页 |
2.1.2 实验方法 | 第39-48页 |
2.2 结果 | 第48-57页 |
2.2.1 HeLa细胞转染效率的确定 | 第48-49页 |
2.2.2 PSMC3特异性siRNA介导的PSMC3基因沉默 | 第49-50页 |
2.2.3 PSMC3调节Ago2的蛋白水平 | 第50-52页 |
2.2.4 沉默PSMC3使胞浆内Ago2的蛋白水平减少 | 第52-53页 |
2.2.5 沉默PSMC3使Ago2的蛋白质半衰期降低 | 第53-54页 |
2.2.6 沉默PSMC3促使Ago2的泛素化增加 | 第54-56页 |
2.2.7 抑制26S蛋白酶复合体可以防止Ago2蛋白降解 | 第56-57页 |
2.3 讨论 | 第57-60页 |
2.4 小结 | 第60-61页 |
三、PSMC3对RNAi途径的影响 | 第61-81页 |
3.1 材料和方法 | 第61-69页 |
3.1.1 实验材料 | 第61-63页 |
3.1.2 实验方法 | 第63-69页 |
3.2 结果 | 第69-76页 |
3.2.1 沉默PSMC3抑制siRNA介导的mRNA剪切 | 第69-70页 |
3.2.2 沉默PSMC3抑制miRNA介导的mRNA剪切 | 第70-72页 |
3.2.3 沉默PSMC3不影响miRNA介导的翻译抑制 | 第72-73页 |
3.2.4 过表达野生型PSMC3不影响RNAi作用 | 第73页 |
3.2.5 过表达PSMC3突变体可以减弱沉默PSMC3对RISC的抑制作用 | 第73-75页 |
3.2.6 MG132可以减弱沉默PSMC3对RISC的抑制作用 | 第75-76页 |
3.3 讨论 | 第76-80页 |
3.4 小结 | 第80-81页 |
全文结论 | 第81-83页 |
论文创新点 | 第83-84页 |
参考文献 | 第84-95页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第95-97页 |
综述 | 第97-108页 |
Argonaute蛋白家族 | 第97-101页 |
综述参考文献 | 第101-108页 |
致谢 | 第108页 |