| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言与文献综述 | 第11-34页 |
| 1.1 甘蔗简介 | 第11-13页 |
| 1.1.1 甘蔗的生物学性质 | 第11页 |
| 1.1.2 甘蔗的经济价值 | 第11-13页 |
| 1.1.2.1 甘蔗是重要的糖料作物 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 甘蔗是重要的能源作物 | 第12页 |
| 1.1.2.3 甘蔗副产品的利用 | 第12-13页 |
| 1.1.3 甘蔗作为转基因受体的优点 | 第13页 |
| 1.2 果聚糖概述 | 第13-24页 |
| 1.2.1 果聚糖的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 果聚糖的功能 | 第15-20页 |
| 1.2.2.1 果聚糖在植物中的作用 | 第15-19页 |
| 1.2.2.1.1 果聚糖与植物的抗逆性 | 第15-16页 |
| 1.2.2.1.2 果聚糖的抗逆性机制 | 第16-19页 |
| 1.2.2.1.2.1 参与渗透调节 | 第16-17页 |
| 1.2.2.1.2.2 非生物胁迫下维持膜稳定性 | 第17-19页 |
| 1.2.2.2 果聚糖在制药方面的应用及其与人类健康的关系 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 果聚糖在食品行业中的应用 | 第20页 |
| 1.2.3 果聚糖代谢的关键酶及其研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.3.1 果聚糖的合成 | 第20-22页 |
| 1.2.3.2 果聚糖的降解 | 第22页 |
| 1.2.4 蔗糖:蔗糖果糖基转移酶1-SST的酶学性质 | 第22-23页 |
| 1.2.5 与植物抗逆性及果聚糖积累的有关基因工程介绍 | 第23-24页 |
| 1.2.5.1 利用果聚糖提高植物抗逆性的相关基因工程 | 第23页 |
| 1.2.5.2 提高果聚糖积累的相关基因工程 | 第23-24页 |
| 1.3 植物的逆境生理以及抗逆性机制 | 第24-29页 |
| 1.3.1 渗透胁迫与渗透调节 | 第24-26页 |
| 1.3.2 细胞膜稳定性及保护酶系统 | 第26-27页 |
| 1.3.3 活性氧的产生与清除 | 第27-28页 |
| 1.3.4 光合作用减弱 | 第28页 |
| 1.3.5 体内激素水平发生变化 | 第28-29页 |
| 1.3.6 逆境蛋白的合成 | 第29页 |
| 1.4 培育(耐)抗逆性作物的重要意义 | 第29-30页 |
| 1.5 甘蔗的遗传转化技术 | 第30-32页 |
| 1.5.1 农杆菌介导法及其特点 | 第30页 |
| 1.5.2 农杆菌介导法的转化机理 | 第30-31页 |
| 1.5.3 农杆菌介导法介导植物遗传转化技术在禾本科植物中的应用 | 第31-32页 |
| 1.6 甘蔗转基因的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.6.1 甘蔗抗虫转基因研究 | 第32页 |
| 1.6.2 甘蔗抗菌转基因研究 | 第32页 |
| 1.6.3 甘蔗抗病毒转基因的研究 | 第32-33页 |
| 1.6.4 抗旱基因改良 | 第33页 |
| 1.6.5 甘蔗抗除草剂转基因研究 | 第33页 |
| 1.6.6 提高甘蔗蔗糖含量和改良蔗糖色泽的转基因研究 | 第33-34页 |
| 2 本研究的目的意义及内容 | 第34-35页 |
| 2.1 本研究的目的意义 | 第34页 |
| 2.2 本研究的内容 | 第34-35页 |
| 2.2.1 转(rbcS)1-SST基因甘蔗的检测 | 第35页 |
| 2.2.2 (pPST2a)1-SST基因的遗传转化及初步检测 | 第35页 |
| 3 材料 | 第35-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 转(rbcS)1-SST基因甘蔗的供试材料 | 第35页 |
| 3.1.2 转化(pPST2a)1-SST基因的试验材料 | 第35页 |
| 3.2 试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.1 检测转(rbcS)1-SST基因甘蔗的实验试剂及仪器 | 第35-36页 |
| 3.2.1.1 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.1.2 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2.2 转(pPST2a)1-SST基因甘蔗检测的实验试剂及仪器 | 第36页 |
| 3.2.2.1 实验试剂 | 第36页 |
| 3.2.2.2 实验仪器 | 第36页 |
| 4 实验方法 | 第36-48页 |
| 4.1 转(rbcS)1-SST甘蔗的检测 | 第36-46页 |
| 4.1.1 转(rbcS)1-SST甘蔗转化植株的分子检测 | 第36-40页 |
| 4.1.1.1 田间植株的PCR验证 | 第36-38页 |
| 4.1.1.1.1 甘蔗总DNA的小量提取 | 第36-37页 |
| 4.1.1.1.2 转化植株目的基因的PCR重复验证 | 第37-38页 |
| 4.1.1.2 转(rbcS)1-SST基因甘蔗的RT-PCR检测 | 第38-40页 |
| 4.1.1.2.1 甘蔗总RNA的小量提取 | 第38-39页 |
| 4.1.1.2.2 反转录合成cDNA | 第39页 |
| 4.1.1.2.3 actin以及目的基因片段的扩增 | 第39-40页 |
| 4.1.2 转(rbcS)1-SST基因甘蔗中目标产物的HPLC检测 | 第40-42页 |
| 4.1.2.1 色谱条件 | 第40页 |
| 4.1.2.2 标准样品配制 | 第40页 |
| 4.1.2.3 流动相的选择 | 第40-41页 |
| 4.1.2.4 样品处理 | 第41页 |
| 4.1.2.5 转(rbcS)1-SST基因甘蔗中可溶性糖的HPLC测定 | 第41页 |
| 4.1.2.6 精密度与回收率分析 | 第41-42页 |
| 4.1.2.6.1 精密度 | 第41页 |
| 4.1.2.6.2 回收率 | 第41-42页 |
| 4.1.3 田间生长生理指标的测定 | 第42页 |
| 4.1.3.1 净光合速率、蒸腾速率、气孔导度及胞间CO_2的测定 | 第42页 |
| 4.1.4 抗(耐)旱性试验及逆境相关生理指标的测定 | 第42-46页 |
| 4.1.4.1 抗(耐)旱材料处理 | 第42页 |
| 4.1.4.2 实验设施 | 第42页 |
| 4.1.4.3 耐抗旱实验设计及其相关生理指标的测定 | 第42-46页 |
| 4.1.4.3.1 干旱胁迫 | 第42页 |
| 4.1.4.3.2 逆境相关生理指标的测定 | 第42-46页 |
| 4.1.4.3.2.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第42-43页 |
| 4.1.4.3.2.2 丙二醛(MDA)含量测定 | 第43-44页 |
| 4.1.4.3.2.3 脯氨酸(Pro)含量的测定 | 第44-45页 |
| 4.1.4.3.2.4 叶片叶绿素总量(Chl)的测定 | 第45页 |
| 4.1.4.3.2.5 株高及直径的测量 | 第45页 |
| 4.1.4.3.2.6 离体叶片保水率的测定 | 第45页 |
| 4.1.4.3.2.7 叶片质膜透性测定 | 第45-46页 |
| 4.1.5 转(rbcS)1-SST基因甘蔗的耐盐性试验 | 第46页 |
| 4.2 (pPST2a)1-SST基因的转化及抗性苗初步鉴定 | 第46-48页 |
| 4.2.1 (pPST2a)1-SST基因的转化 | 第46-48页 |
| 4.2.1.1 甘蔗转化材料及其农杆菌菌液的准备 | 第46-48页 |
| 4.2.1.1.1 几种主要的甘蔗培养基 | 第46页 |
| 4.2.1.1.2 甘蔗外植体的处理及愈伤组织的培养 | 第46-47页 |
| 4.2.1.1.3 农杆菌菌液的准备 | 第47页 |
| 4.2.1.1.4 愈伤组织的预处理 | 第47页 |
| 4.2.1.1.5 农杆菌侵染愈伤组织 | 第47页 |
| 4.2.1.1.6 共培养 | 第47页 |
| 4.2.1.1.7 农杆菌浸染后的愈伤组织分化成苗 | 第47页 |
| 4.2.1.1.8 甘蔗小植株的筛选培养 | 第47-48页 |
| 4.2.1.1.9 抗性苗的单株培养 | 第48页 |
| 4.2.1.1.10 抗性苗的生根培养及炼苗 | 第48页 |
| 4.2.2 抗性小苗的PCR检测 | 第48页 |
| 4.2.2.1 甘蔗小苗总DNA的小量提取 | 第48页 |
| 4.2.2.2 甘蔗抗性小苗的目的基因PCR检测 | 第48页 |
| 4.2.3 抗性小苗的初步逆境胁迫实验 | 第48页 |
| 4.2.3.1 抗性小苗的模拟干旱胁迫及盐胁迫实验 | 第48页 |
| 4.2.3.2 抗性小苗的干旱胁迫实验 | 第48页 |
| 5 结果与分析 | 第48-72页 |
| 5.1 转(rbcS)1-SST基因甘蔗转化植株的检测 | 第48-66页 |
| 5.1.1 转(rbsc)1一SST基因甘蔗转化植株的分子检测 | 第48-51页 |
| 5.1.1.1 转(rbcs)1一SST基因甘蔗转化植株的PCR检测 | 第48-50页 |
| 5.1.1.1.1 田间植株的DNA小量提取 | 第49页 |
| 5.1.1.1.2 PCR检测 | 第49-50页 |
| 5.1.1.2 转(rbcS)1-SST甘蔗基因转化植株的RT-PCR检测 | 第50-51页 |
| 5.1.1.2.1 RNA的小量提取 | 第50页 |
| 5.1.1.2.2 RT-PCR检测 | 第50-51页 |
| 5.1.2 转(rbcS)1-SST基因甘蔗中目标产物的HPLC检测 | 第51-54页 |
| 5.1.2.1 标准曲线的制作 | 第51页 |
| 5.1.2.2 样品分析 | 第51-53页 |
| 5.1.2.3 精密度与回收率 | 第53-54页 |
| 5.1.2.3.1 精密度 | 第53-54页 |
| 5.1.2.3.2 回收率 | 第54页 |
| 5.1.2.4 计算方法 | 第54页 |
| 5.1.3 转(rbcS)1-SST基因甘蔗的田间生长生理指标的测定 | 第54-56页 |
| 5.1.4 抗(耐)旱性试验及逆境相关生理指标 | 第56-63页 |
| 5.1.4.1 抗(耐)旱性试验 | 第56-58页 |
| 5.1.4.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第58页 |
| 5.1.4.3 丙二醛(MDA)含量的测定 | 第58-59页 |
| 5.1.4.4 脯氨酸(Pro)含量的测定 | 第59-60页 |
| 5.1.4.5 干旱胁迫对甘蔗叶绿素总量(Chl)的影响 | 第60-61页 |
| 5.1.4.6 干旱对甘蔗生长的影响 | 第61页 |
| 5.1.4.7 离体叶片保水率测定 | 第61-62页 |
| 5.1.4.8 细胞质膜透性的测定 | 第62-63页 |
| 5.1.5 耐盐性试验 | 第63-66页 |
| 5.1.5.1 盐胁迫下叶绿素含量的测定 | 第65-66页 |
| 5.2 (pPST2a)1-SST基因的农杆菌介导法转化甘蔗优良品种及抗性苗初步鉴定 | 第66-72页 |
| 5.2.1 农杆菌介导的甘蔗遗传转化 | 第66-68页 |
| 5.2.2 转(pPST2a)1-SST基因的抗性苗的PCR检测 | 第68-69页 |
| 5.2.2.1 甘蔗幼苗总DNA小量提取 | 第68页 |
| 5.2.2.2 转(pPST2a)-SST基因的抗性甘蔗小苗的PCR检测 | 第68-69页 |
| 5.2.3 转(pPST2a)1-SST基因的甘蔗幼苗的模拟干旱及盐胁迫 | 第69-71页 |
| 5.2.3.1 转(pPST2a)1-SST基因的甘蔗幼苗的模拟干旱胁迫试验 | 第69-70页 |
| 5.2.3.2 转(pPST2a)1-SST基因的甘蔗幼苗的耐盐性试验 | 第70-71页 |
| 5.2.4 转(pPST2a)1-SST基因的甘蔗幼苗的干旱胁迫实验 | 第71-72页 |
| 6 结论 | 第72-73页 |
| 6.1 转(rbcS)1-SST基因甘蔗的检测 | 第72页 |
| 6.2 (pPST2a)1-SST基因的转化及抗性苗抗逆性初步验证 | 第72-73页 |
| 7 讨论 | 第73-74页 |
| 7.1 关于1-SST基因 | 第73页 |
| 7.2 关于1-SST基因的表达产物 | 第73页 |
| 7.3 关于逆境指标的选择 | 第73-74页 |
| 8 本研究的后续工作 | 第74页 |
| 参考文献 | 第74-87页 |
| 9 缩写词 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
