| 本课题受如下基金资助 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 英文縮写注解 | 第15-17页 |
| 第一章 肿瘤细胞免疫球蛋白(Ig)基因发生类别转换重组 | 第17-37页 |
| 一、前言 | 第17-27页 |
| 二、材料和方法 | 第27-31页 |
| 1. 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 细胞系 | 第27页 |
| 1.2 主要抗体 | 第27页 |
| 1.3 引物 | 第27-28页 |
| 1.4 主要试剂和试剂盒 | 第28页 |
| 1.5 主要仪器 | 第28页 |
| 2. 主要方法 | 第28-31页 |
| 2.1 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.2 细胞总蛋白的抽提及蛋白质浓度的测定 | 第29页 |
| 2.3 Western Blotting分析 | 第29页 |
| 2.4 用TRIzol试剂提取肿瘤细胞的RNA | 第29页 |
| 2.5 逆转录PCR(RT-PCR) | 第29-30页 |
| 2.6 巢式PCR(nested PCR) | 第30-31页 |
| 三、实验结果 | 第31-35页 |
| 1. 上皮性肿瘤细胞表达Ig α重链 | 第31页 |
| 2. 肿瘤细胞表达VDJ-Cα转录本 | 第31-32页 |
| 3. 肿瘤细胞表达Ig Iα-Cα转录本 | 第32-33页 |
| 4. 确定上皮性肿瘤细胞已经在基因组水平发生CSR | 第33-35页 |
| 四、分析与讨论 | 第35-36页 |
| 五、小结 | 第36-37页 |
| 第二章 肿瘤细胞异常表达活化诱导的胞嘧啶脱氨酶(AID)及其调控机制 | 第37-61页 |
| 一、前言 | 第37-44页 |
| 二、材料和方法 | 第44-50页 |
| 1. 材料 | 第44-46页 |
| 1.1 细胞系 | 第44页 |
| 1.2 鼻咽癌组织芯片 | 第44-45页 |
| 1.3 主要抗体 | 第45页 |
| 1.4 引物 | 第45-46页 |
| 1.5 主要试剂和试剂盒 | 第46页 |
| 1.6 主要仪器 | 第46页 |
| 2. 主要方法 | 第46-50页 |
| 2.1 细胞培养 | 第46-47页 |
| 2.2 细胞总蛋白的抽提及蛋白质浓度的测定 | 第47页 |
| 2.3 Western Blotting分析 | 第47页 |
| 2.4 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第47-48页 |
| 2.5 用TRIzol试剂提取肿瘤细胞的RNA | 第48页 |
| 2.6 逆转录PCR(RT-PCR) | 第48页 |
| 2.7 免疫组织化学实验 | 第48-49页 |
| 2.8 免疫荧光-激光共聚焦实验 | 第49-50页 |
| 三、实验结果 | 第50-58页 |
| 1. 鼻咽癌组织样本中AID表达升高 | 第50-51页 |
| 2. AID表达于多种上皮性肿瘤细胞和永生化细胞 | 第51-52页 |
| 3. 炎症因子TNF-α诱导肿瘤细胞中AID的异常表达 | 第52-55页 |
| 4. 肿瘤细胞中AID与PKA共定位 | 第55-56页 |
| 5. AID和PKA靶向结合至肿瘤细胞Ig重链基因的Sα区 | 第56-58页 |
| 四、分析与讨论 | 第58-60页 |
| 五、小结 | 第60-61页 |
| 第三章 转录因子Ets-1通过活化Ig Iα启动子激活上皮性肿瘤表达Ig Iα-Cα胚系转录本 | 第61-89页 |
| 一、前言 | 第61-68页 |
| 二、材料和方法 | 第68-74页 |
| 1. 材料 | 第68-71页 |
| 1.1 细胞系 | 第68页 |
| 1.2 主要抗体 | 第68页 |
| 1.3 主要质粒 | 第68-69页 |
| 1.4 探针和引物 | 第69-70页 |
| 1.5 主要试剂和试剂盒 | 第70-71页 |
| 1.6 主要仪器 | 第71页 |
| 2. 主要方法 | 第71-74页 |
| 2.1 细胞总蛋白的抽提及蛋白质浓度的测定 | 第71页 |
| 2.2 Western Blotting分析 | 第71-72页 |
| 2.3 Lipofectamine~(TM) 2000介导的瞬时转染 | 第72页 |
| 2.4 双荧光素酶报告基因技术 | 第72页 |
| 2.5 凝胶迁移滞后实验(EMSA) | 第72页 |
| 2.6 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第72-73页 |
| 2.7 用TRIzol试剂提取肿瘤细胞的RNA | 第73页 |
| 2.8 逆转录PCR(RT-PCR) | 第73-74页 |
| 三、实验结果 | 第74-86页 |
| 1. 筛选调控Ig Iα启动子活化的顺式作用元件 | 第74-75页 |
| 2. 确定效应DNA节段中可能的转录因子的结合位点及其反式激活能力 | 第75-76页 |
| 3. 分析转录因子Ets-1与Ig Iα启动子区相应DNA的结合能力 | 第76-80页 |
| 4. 靶向沉默转录因子Ets-1,确定其对Ig Iα启动子的活性和转录水平的调控 | 第80-82页 |
| 5. 细胞因子TGF-β1通过Ets-1上调Ig Iα启动子的活性以及Ig a重链的表达 | 第82-86页 |
| 四、分析与讨论 | 第86-88页 |
| 五、结论 | 第88-89页 |
| 总结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录：已发表文章 | 第101-110页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
