| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一部分 人胰腺癌肿瘤干细胞的分选和生物学特性的研究 | 第11-36页 |
| 第一章 绪论 | 第11-14页 |
| 1.1 课题来源、研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外研究概况 | 第12-13页 |
| 1.3 论文的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-21页 |
| 2.1 研究对象及仪器设备 | 第14-17页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第14页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第14-17页 |
| 2.2 实验流程与方法 | 第17-21页 |
| 2.2.1 人胰腺癌干细胞的获得 | 第17页 |
| 2.2.2 RT-PCR 检测 Oct4、Nanog 基因的表达 | 第17-19页 |
| 2.2.2.1 用 Trizol Reagent 提取未分选的 PANC-1 细胞 CD24+CD44+ESA+细胞总 RNA | 第17-18页 |
| 2.2.2.2 逆转录（RT） | 第18页 |
| 2.2.2.3 PCR 反应 | 第18-19页 |
| 2.2.3 细胞免疫荧光测 Oct4 和 Nanog 的表达 | 第19页 |
| 2.2.4 CCK8 法检测细胞增殖率及生长曲线 | 第19-20页 |
| 2.2.5 CCK8 法检测细胞耐药性 | 第20-21页 |
| 第三章 结果 | 第21-30页 |
| 3.1 胰腺癌细胞的培养和干细胞的获得 | 第21-24页 |
| 3.2 PCR 检测 Oct4 和 Nanog 基因的表达 | 第24页 |
| 3.3 细胞免疫荧光测 Oct4 和 Nanog 基因的表达 | 第24-27页 |
| 3.4 CCK8 检测细胞增殖率及生长曲线 | 第27页 |
| 3.5 CCK8 法检测细胞耐药性 | 第27-30页 |
| 第四章 讨论 | 第30-32页 |
| 第五章 结论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 第二部分 沉默 OCT4 和 NANOG 基因抑制胰腺癌干细胞干性特性的研究 | 第36-64页 |
| 第一章 绪论 | 第36-40页 |
| 1.1 课题来源、研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 1.2 目前国内外研究概况 | 第38页 |
| 1.3 课题主要研究内容 | 第38-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-48页 |
| 2.1 研究资料和仪器设备 | 第40-42页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第40页 |
| 2.1.2 仪器设备与试剂 | 第40-42页 |
| 2.2 实验流程和方法 | 第42-48页 |
| 2.2.1 荧光定量 PCR 检测 Oct4 和 Nanog 基因的表达 | 第42-43页 |
| 2.2.2 Western blot 检测 Oct4 和 Nanog 蛋白的表达 | 第43-44页 |
| 2.2.3 沉默 PCSCs 中的 Oct4、Nanog 的表达，FQRT-PCR 和 Westernblot 的方法分别在转录和翻译水平检测干扰效率 | 第44-45页 |
| 2.2.4 单克隆形成实验和 CCK8 法检测 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 增殖的影响 | 第45页 |
| 2.2.5 Transwell 小室模型检测 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 迁移和侵袭能力的影响 | 第45-46页 |
| 2.2.6 CCK8 法检测 Oct4、Nanog 对 PCSCs 药物敏感性的影响 | 第46页 |
| 2.2.7 用 AnnexinV-APC/7-ADD 双染检测 Oct4、Nanog 基因对 PCSCs凋亡能力的影响 | 第46-47页 |
| 2.2.8 NOD／SCID 小鼠致瘤实验观察 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 致瘤性的影响 | 第47页 |
| 2.2.9 统计处理 | 第47-48页 |
| 第三章 结果 | 第48-59页 |
| 3.1 FQRT-PCR 检测 Oct4、Nanog 基因 | 第48-49页 |
| 3.2 Western blot 结果发现胚胎干性相关基因 Oct4、Nanog 在 PCSCs 中显著高表达, | 第49页 |
| 3.3 FQRT-PCR 和 Western blot 检测 LV 感染后 PCSCs 中的 Oct4 和 Nanog的表达， | 第49-50页 |
| 3.4 单克隆形成实验以及 CCK8 法检测 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 增殖的影响 | 第50-52页 |
| 3.5 Transwell 小室模型检测胚胎干性相关基因 Oct4 和 Nanog 对 PCSCs 迁移和侵袭能力的影响 | 第52-53页 |
| 3.6 CCK8 法检测 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 药物敏感性的影响 | 第53-54页 |
| 3.7 用 AnnexinV-APC/7-ADD 双染检测 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 凋亡能力的影响 | 第54-56页 |
| 3.8 NOD／SCID 小鼠致瘤检测 Oct4 和 Nanog 基因对 PCSCs 致瘤能力的影响 | 第56-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 英文缩写词表 | 第68-70页 |
| 综述 | 第70-82页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
