| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·植物次生代谢与次生代谢物 | 第12页 |
| ·植物萜类概述 | 第12页 |
| ·丹参二萜类化合物丹参酮类研究进展 | 第12-15页 |
| ·丹参介绍 | 第12-13页 |
| ·二萜类化合物丹参酮研究进展 | 第13-15页 |
| ·丹参酮类化合物生物合成途径研究进展 | 第15-17页 |
| ·诱导子高效调控丹参酮生物合成 | 第17-19页 |
| ·诱导子 | 第17-18页 |
| ·毛状根培养 | 第18页 |
| ·诱导子对丹参酮含量提高的作用 | 第18-19页 |
| ·植物次生代谢的调控 | 第19-20页 |
| ·通过转基因方法提高植物次生代谢产物 | 第19页 |
| ·通过转录因子调控植物次生代谢 | 第19-20页 |
| ·研究思路及技术路线 | 第20-21页 |
| ·获得SmDXR基因 | 第20页 |
| ·获得SmDXR基因的组织表达谱和诱导表达谱 | 第20页 |
| ·SmDXR通过E.coli颜色互补实验初步验证其功能 | 第20页 |
| ·构建反义SmDXR植物表达表达载体 | 第20页 |
| ·SmDXSI启动子克隆及分析 | 第20-21页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-39页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·质粒及菌种 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·购买的试剂、酶及药品等 | 第23-24页 |
| ·常用试剂 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-39页 |
| ·丹参无菌苗的培养 | 第24页 |
| ·丹参DXR基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·丹参RNA的提取与检测 | 第24-25页 |
| ·准备工作 | 第24页 |
| ·抽提丹参RNA | 第24-25页 |
| ·检测RNA的质量与纯度 | 第25页 |
| ·3’RACE | 第25-26页 |
| ·丹参第一链cDNA的合成 | 第25页 |
| ·3’端cDNA片段扩增 | 第25-26页 |
| ·SmDXR ORF的扩增 | 第26-27页 |
| ·SmDXR在丹参根、茎和叶的RT-PCR分析 | 第27-28页 |
| ·RNA的提取 | 第27页 |
| ·RT-PCR | 第27-28页 |
| ·丹参毛状根中SmDXR在不同诱导子处理下的表达 | 第28-29页 |
| ·丹参毛状根的获得 | 第28页 |
| ·诱导子的制备方法 | 第28页 |
| ·RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR | 第29页 |
| ·SmDXR在大肠杆菌中的功能鉴定 | 第29-32页 |
| ·pTrc载体的构建 | 第29页 |
| ·对质粒pTrc-AtIPⅠ进行PstⅠ单酶切 | 第29页 |
| ·对质粒pTrc-AtIPⅠ PstⅠ单酶切回收产物进行自连 | 第29页 |
| ·pTrc-SmDXR载体的构建 | 第29-31页 |
| ·BglⅡ和NotⅠ双酶切质粒pMD18-T+BglⅡ-SmDXR-NotⅠ | 第30页 |
| ·BglⅡ和NotⅠ双酶切质粒pTrc-AtIPⅠ | 第30页 |
| ·将带有BglⅡ和NotⅠ酶切接头的SmDXR片段与BglⅡ和NotⅠ双酶切pTrc-AtIPⅠ的大片段连接 | 第30-31页 |
| ·共转化pTrc载体和pTrc-SmDXR载体 | 第31页 |
| ·共转化pTrc载体和pAC-LYC载体 | 第31页 |
| ·转化pAC-LYC载体进入DH5α | 第31页 |
| ·制作功能验证平板 | 第31-32页 |
| ·构建反义SmDXR植物表达表达载体 | 第32-35页 |
| ·Taq酶扩增得到BstEⅡ和BglⅡ酶切位点的SmDXR片段 | 第32页 |
| ·带有BstEⅡ和BglⅡ酶切位点的反义SmDXR片段连接pMD18T并转化 | 第32-33页 |
| ·对pMD18T-反义SmDXR重组质粒进行酶切 | 第33页 |
| ·BstEⅡ和BglⅡ酶切pCAMBIA1304~+载体 | 第33页 |
| ·BstEⅡ和BglⅡ酶切位点的SmDXR片段连接BstEⅡ和BglⅡ酶切pCAMBIA1304~+载体大片段并转化,获得阳性克隆 | 第33-34页 |
| ·pCAMBIA1304~+-反义SmDXR质粒抽提并转化进入发根农杆菌C58C1 | 第34-35页 |
| ·SmDXSI启动子的克隆 | 第35-39页 |
| ·丹参总DNA的提取 | 第35页 |
| ·丹参总DNA酶切及加相关接头 | 第35-37页 |
| ·丹参总DNA酶切 | 第35-37页 |
| ·XbaⅠ酶切丹参总DNA | 第35-36页 |
| ·EcoRⅠ酶切丹参总DNA | 第36页 |
| ·丹参总DNA酶切产物连接相关接头 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·对获得的SmDXSI启动子进行顺式作用元件预测 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-54页 |
| ·总RNA的提取 | 第39页 |
| ·丹参酮代谢途径5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因(SmDXR)cDNA的克隆及序列分析 | 第39-47页 |
| ·SmDXR的克隆 | 第39-40页 |
| ·SmDXR序列的生物信息学分析 | 第40-43页 |
| ·SmDXR组织表达谱 | 第43-44页 |
| ·SmDXR诱导表达谱 | 第44-46页 |
| ·在大肠杆菌中验证SmDXR基因的功能 | 第46-47页 |
| ·反义SmDXR植物表达表达载体构建 | 第47-49页 |
| ·BglⅡ不完全酶切最佳时间点的探索 | 第47页 |
| ·pCAMBIA1304~++antiDXR in DH5α PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·pCAMBIA1304~++antiDXR in C58C1 PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·SmDXSI启动子的克隆 | 第49-54页 |
| ·丹参总DNA的提取 | 第49页 |
| ·丹参总DNA酶切及加相关接头 | 第49-50页 |
| ·PCR结果 | 第50-52页 |
| ·对获得的SmDXSI启动子进行顺式作用元件预测 | 第52-54页 |
| 第四章 总结与展望 | 第54-56页 |
| ·研究结论 | 第54-55页 |
| ·后续研究方向 | 第55-56页 |
| ·SmDXR过量表达及反义抑制 | 第55页 |
| ·对丹参酮代谢途径中关键酶基因启动子的研究 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
