| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-17页 |
| 第一章 Ⅱ型单纯疱疹病毒及其疫苗研究进展 | 第11-17页 |
| ·Ⅱ型单纯疱疹病毒 | 第11-12页 |
| ·HSV-2 感染过程 | 第12-13页 |
| ·HSV-2 与天然免疫 | 第13页 |
| ·HSV-2 与获得性免疫 | 第13-14页 |
| ·HSV-2 疫苗 | 第14-15页 |
| ·问题及展望 | 第15-17页 |
| 试验研究 | 第17-53页 |
| 第二章 单纯疱疹病毒（HSV）的培养、收获和病毒滴度的测定 | 第17-21页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·病毒、细胞 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第17页 |
| ·常用试剂的配制 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-19页 |
| ·Vero 细胞的复苏及培养 | 第18页 |
| ·HSV-2 333 株在Vero 细胞中的培养与收获 | 第18页 |
| ·HSV-2 333 株浓缩与纯化 | 第18页 |
| ·HSV-2 333 株全病毒灭活及蛋白定量 | 第18-19页 |
| ·HSV-2 病毒半数组织感染量(TCID50)的测定 | 第19页 |
| ·结果 | 第19-20页 |
| ·HSV-2 333 株感染Vero 细胞病变 | 第19-20页 |
| ·灭活HSV-2 蛋白含量 | 第20页 |
| ·讨论 | 第20-21页 |
| 第三章 Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白B 表位的筛选鉴定 | 第21-36页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·病毒株与细胞 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·生物信息学分析 | 第22-23页 |
| ·肽段合成 | 第23页 |
| ·肽段的偶联 | 第23页 |
| ·动物，免疫及血清收集 | 第23页 |
| ·ELISA 法检测血清抗体水平 | 第23-24页 |
| ·ELISA 方法检测血清中特异性抗体亚型 | 第24页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IL-4 和IL-10 水平 | 第24页 |
| ·中和试验 | 第24页 |
| ·表位免疫小鼠脾脏淋巴细胞制备 | 第24-25页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第25页 |
| ·HLA-A*0201 的结合活性试验 | 第25-26页 |
| ·ELISPOT 方法检测小鼠脾脏细胞IFN-γ的分泌 | 第26页 |
| ·FCM 检测表位肽诱发细胞杀伤作用 | 第26页 |
| ·结果统计 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-34页 |
| ·生物信息学预测表位结果 | 第27-28页 |
| ·合成肽相关信息 | 第28-29页 |
| ·ELISA 法检测B 细胞表位小鼠血清抗体效价 | 第29页 |
| ·ELISA 法检测B 细胞表位小鼠血清抗体亚型效价 | 第29-30页 |
| ·ELISA 方法检测血清中IL-4 和IL-10 水平 | 第30-31页 |
| ·ELISOPT 检测抗体分泌型细胞 | 第31页 |
| ·中和抗体水平检测 | 第31-32页 |
| ·HLA-A*0201 的结合活性试验结果 | 第32页 |
| ·ELISPOT 方法检测小鼠脾脏细胞IFN-γ的分泌 | 第32-33页 |
| ·FCM 检测表位诱发细胞杀伤作用 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D 在杆状病毒表达系统中表达 | 第36-53页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·病毒、菌种、细胞 | 第36页 |
| ·质粒和引物 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-47页 |
| ·HSV-2 333 株全DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR）扩增HSV-2 gD 基因片段 | 第40页 |
| ·目的片段的回收 | 第40-41页 |
| ·双酶切供体质粒pFastBac? 和胶回收后的PCR 产物 | 第41页 |
| ·目的片段与供体质粒pFastBacⅠ的连接 | 第41页 |
| ·感受态细胞的制备（CaC12 法）和连接产物的转化 | 第41-42页 |
| ·菌落PCR 扩增目的片段检测重组质粒 | 第42页 |
| ·重组克隆质粒的提取 | 第42页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的测序 | 第43页 |
| ·重组穿梭质粒Bacmid-gD 的构建、鉴定与提取 | 第43页 |
| ·转化产物的鉴定 | 第43页 |
| ·重组穿梭质粒Bacmid-gD（简称重组杆粒）的提取和鉴定 | 第43-45页 |
| ·昆虫细胞的复苏 | 第45页 |
| ·昆虫细胞的贴壁培养 | 第45页 |
| ·重组杆粒转染昆虫细胞 | 第45-46页 |
| ·第1 代(P1)病毒的分离及传代培养 | 第46页 |
| ·病毒毒种的建立与保存 | 第46页 |
| ·病毒毒力的测定 | 第46页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白的扩大表达 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·HSV-2 DNA 提取物含量 | 第47页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因及扩增产物的胶回收 | 第47-48页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定 | 第48页 |
| ·重组杆粒OD 值测量结果 | 第48页 |
| ·重组杆粒转染昆虫细胞分子水平结果 | 第48-49页 |
| ·P3 病毒感染昆虫细胞72h 细胞CPE 情况 | 第49-50页 |
| ·Western blot 蛋白水平鉴定重组蛋白表达结果 | 第50页 |
| ·病毒毒力的测定 | 第50页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 英文缩略词 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简介 | 第64页 |
