| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 山葡萄简介 | 第12页 |
| 1.2 山葡萄花色苷概要 | 第12-14页 |
| 1.2.1 花色苷的结构及种类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 花色苷的生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR技术简介 | 第14-16页 |
| 1.3.1 荧光定量PCR技术原理 | 第14-15页 |
| 1.3.2 实时荧光定量PCR的定量方法 | 第15-16页 |
| 1.3.2.1 绝对定量法 | 第15页 |
| 1.3.2.2 相对定量法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 实时荧光定量PCR技术的优点及应用 | 第16页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 山葡萄转色前果皮cDNA文库的构建 | 第17-28页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1.1 菌株、酶及生化试剂 | 第17页 |
| 2.1.1.2 仪器设备 | 第17页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第17-24页 |
| 2.1.2.1 山葡萄果皮总RNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.1.2.2 cDNA文库构建第一链的合成 | 第18-19页 |
| 2.1.2.3 cDNA第二链的合成 | 第19-20页 |
| 2.1.2.4 山葡萄ds cDNA的纯化及片段的分级分离 | 第20-21页 |
| 2.1.2.5 ds cDNA与pSMART2IFD载体的连接 | 第21-22页 |
| 2.1.2.6 重组质粒转化到E.coli | 第22页 |
| 2.1.2.7 初始文库滴度测定与文库的扩增 | 第22-23页 |
| 2.1.2.8 文库插入片段长度与重组率检测 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.2.1 RNA提取结果 | 第24-25页 |
| 2.2.2 ds cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.2.3 双链cDNA的分级分离 | 第25页 |
| 2.2.4 cDNA文库的质量的评价 | 第25-26页 |
| 2.3 讨论与结论 | 第26-28页 |
| 2.3.1 讨论 | 第26-27页 |
| 2.3.2 结论 | 第27-28页 |
| 第三章 CHS和CHI基因的克隆与分析 | 第28-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第28-33页 |
| 3.1.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1.1 载体、菌株及主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第28-33页 |
| 3.1.2.1 引物的设计 | 第28页 |
| 3.1.2.2 山葡萄总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.1.2.3 反转录cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| 3.1.2.4 PCR扩增目的基因片段 | 第29-30页 |
| 3.1.2.5 PCR扩增产物的胶回收 | 第30页 |
| 3.1.2.6 回收产物与载体连接 | 第30页 |
| 3.1.2.7 大肠杆菌感受态的转化及测序 | 第30-31页 |
| 3.1.2.8 RACE法cDNA末端的快速克隆 | 第31-32页 |
| 3.1.2.9 目的基因cDNA全长序列的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 3.2 结果与分析 | 第33-43页 |
| 3.2.1 总RNA的提取与检测 | 第33页 |
| 3.2.2 CHS基因的克隆与分析 | 第33-38页 |
| 3.2.2.1 VamCHS cDNA全长序列的克隆与分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2.2 VamCHS编码蛋白质理化性状分析 | 第34页 |
| 3.2.2.3 VamCHS蛋白的保守区分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2.4 VamCHS蛋白的亲水性分析 | 第35-36页 |
| 3.2.2.5 VamCHS蛋白跨膜结构域分析 | 第36页 |
| 3.2.2.6 VamCHS蛋白的信号肽及二级结构分析 | 第36页 |
| 3.2.2.7 VamCHS蛋白的细胞定位分析 | 第36-37页 |
| 3.2.2.8 VamCHS编码蛋白质的同源性及进化树 | 第37-38页 |
| 3.2.3 CHI基因的克隆与分析 | 第38-43页 |
| 3.2.3.1 VamCHI cDNA全长序列的克隆与分析 | 第38-39页 |
| 3.2.3.2 VamCHI基因编码蛋白质理化性状分析 | 第39页 |
| 3.2.3.3 VamCHI蛋白的保守区分析 | 第39-40页 |
| 3.2.3.4 VamCHI蛋白的亲水性分析 | 第40页 |
| 3.2.3.5 VamCHI蛋白的跨膜结构域分析 | 第40-41页 |
| 3.2.3.6 VamCHI蛋白的信号肽预测及二级结构分析 | 第41页 |
| 3.2.3.7 VamCHI蛋白的细胞定位分析 | 第41页 |
| 3.2.3.8 VamCHI编码蛋白质的同源性及进化分析 | 第41-43页 |
| 3.3 讨论与结论 | 第43-45页 |
| 3.3.1 讨论 | 第43-44页 |
| 3.3.2 结论 | 第44-45页 |
| 第四章 山葡萄着色过程中VamCHS和VamCHI的表达分析 | 第45-55页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第45页 |
| 4.1.4 试验方法 | 第45-48页 |
| 4.1.4.1 RNA的提取 | 第45页 |
| 4.1.4.2 模版cDNA第一链的制备 | 第45-46页 |
| 4.1.4.3 PCR引物设计及合成 | 第46页 |
| 4.1.4.4 引物的普通PCR验证 | 第46-47页 |
| 4.1.4.5 引物特异性的验证 | 第47页 |
| 4.1.4.6 标准曲线的制备 | 第47页 |
| 4.1.4.7 VamCHS和VamCHI基因的相对表达量分析 | 第47页 |
| 4.1.4.8 数据处理 | 第47-48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-54页 |
| 4.2.1 RNA的提取 | 第48页 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR引物的常规PCR扩增 | 第48页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR标准曲线的制备 | 第48-52页 |
| 4.2.4 VamCHS和VamCHI基因在果皮不同时期的表达水平分析 | 第52-54页 |
| 4.3 讨论与结论 | 第54-55页 |
| 4.3.1 讨论 | 第54页 |
| 4.3.2 结论 | 第54-55页 |
| 第五章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
