| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 甲壳素 | 第12页 |
| 1.2 壳聚糖 | 第12-13页 |
| 1.3 壳寡糖 | 第13-15页 |
| 1.3.1 壳寡糖的性质及功能 | 第13-14页 |
| 1.3.1.1 水溶性以及保湿性 | 第13页 |
| 1.3.1.2 抗菌抑菌 | 第13-14页 |
| 1.3.1.3 降低胆固醇 | 第14页 |
| 1.3.1.4 抗肿瘤活性 | 第14页 |
| 1.3.2 壳寡糖的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2.1 壳寡糖在食品行业中的应用 | 第14页 |
| 1.3.2.2 壳寡糖在化妆品行业中的应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2.3 壳寡糖在生物医学领域的应用 | 第15页 |
| 1.3.2.4 壳寡糖在农产品上的应用 | 第15页 |
| 1.4 壳寡糖在工业上的制备 | 第15-17页 |
| 1.4.1 化学法 | 第15-16页 |
| 1.4.1.1 酸水解法 | 第15-16页 |
| 1.4.1.2 氧化降解法 | 第16页 |
| 1.4.2 物理法 | 第16页 |
| 1.4.2.1 超声波法 | 第16页 |
| 1.4.2.2 辐射降解 | 第16页 |
| 1.4.2.3 光降解 | 第16页 |
| 1.4.3 酶降解法 | 第16-17页 |
| 1.4.3.1 壳聚糖酶 | 第16页 |
| 1.4.3.2 溶菌酶 | 第16-17页 |
| 1.4.3.3 凡丁质酶 | 第17页 |
| 1.5 壳聚糖酶的概述 | 第17-19页 |
| 1.5.1 壳聚糖酶的性质 | 第17页 |
| 1.5.2 根据壳聚糖酶氨基酸序列的分类 | 第17-18页 |
| 1.5.3 壳聚糖酶的异源表达 | 第18页 |
| 1.5.4 壳聚糖酶的应用 | 第18-19页 |
| 1.6 大肠杆菌生产重组蛋白的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.6.1 大肠杆菌重组蛋白表达系统 | 第19页 |
| 1.6.2 大肠杆菌的分泌表达 | 第19-20页 |
| 1.6.3 大肠杆菌的胞外分泌 | 第20页 |
| 1.6.4 大肠杆菌的高密度发酵 | 第20-21页 |
| 1.7 本文的研究意义与目的 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-32页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.1.2 质粒表 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.3.1 酶 | 第23页 |
| 2.1.3.2 试剂 | 第23页 |
| 2.1.3.3 试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.5 实验主要涉及的溶液 | 第24-25页 |
| 2.1.6 引物 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 质粒DNA的抽提 | 第25页 |
| 2.2.2 酵母总DNA的抽提 | 第25-26页 |
| 2.2.3 溶液回收目的DNA片段 | 第26页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶回收目的DNA片段 | 第26页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.6 PCR扩增目的基因 | 第26-27页 |
| 2.2.7 常规转化步骤 | 第27页 |
| 2.2.8 菌落PCR验证重组子 | 第27页 |
| 2.2.9 快速筛选重组子的方法 | 第27页 |
| 2.2.10 外源基因在大肠杆菌中的诱导与表达 | 第27-28页 |
| 2.2.11 SDS-PAGE | 第28-29页 |
| 2.2.11.1 配制12%的分离胶 | 第28页 |
| 2.2.11.2 配制4%的浓缩胶 | 第28页 |
| 2.2.11.3 蛋白变性处理 | 第28-29页 |
| 2.2.11.4 上样、电泳 | 第29页 |
| 2.2.11.5 染色、脱色 | 第29页 |
| 2.2.12 酶活测定方法 | 第29页 |
| 2.2.13 重组大肠杆菌胞外产CSN最适条件的确定 | 第29-30页 |
| 2.2.13.1 最佳甘油浓度 | 第29-30页 |
| 2.2.13.2 最佳温度 | 第30页 |
| 2.2.13.3 最佳诱导剂 | 第30页 |
| 2.2.13.4 最佳渗透剂 | 第30页 |
| 2.2.13.5 最佳甘氨酸浓度 | 第30页 |
| 2.2.14 重组大肠杆菌发酵罐高密度发酵 | 第30-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-43页 |
| 3.1 壳聚糖酶CSN基因的克隆以及三种分泌表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.1 壳聚糖酶基因CSN的获取 | 第32-33页 |
| 3.1.2 三种重组分泌表达载体的构建 | 第33页 |
| 3.1.3 重组表达载体的验证 | 第33页 |
| 3.2 三种重组大肠杆菌菌株的诱导表达 | 第33-36页 |
| 3.2.1 His-tag对重组大肠杆菌生长状态的影响 | 第35页 |
| 3.2.2 His-tag对重组大肠杆菌表达壳聚糖酶的影响 | 第35-36页 |
| 3.3 N端带有6xHis-tag重组大肠杆菌胞外生产CSN的优化 | 第36-41页 |
| 3.3.1 甘油浓度对重组CSN-N胞外分泌的影响 | 第36页 |
| 3.3.1.1 甘油浓度对重组大肠杆菌生长状态的影响 | 第36页 |
| 3.3.1.2 甘油浓度对重组大肠杆菌CSN-N胞外分泌的影响 | 第36页 |
| 3.3.2 诱导温度对重组CSN-N胞外分泌的影响 | 第36-38页 |
| 3.3.2.1 诱导温度对重组大肠杆菌生长状态的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.2.2 诱导温度对重组大肠杆菌CSN-N胞外分泌的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.3 两种诱导剂IPTG和乳糖对重组CSN-N胞外分泌的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.3.1 两种诱导剂对重组大肠杆菌生长状态的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.3.2 两种诱导剂对重组大肠杆菌CSN-N胞外分泌的影响 | 第39页 |
| 3.3.4 不同培养基渗透剂对重组CSN-N胞外分泌的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.4.1 不同培养基渗透剂对重组大肠杆菌生长状态的影响 | 第39页 |
| 3.3.4.2 不同培养基渗透剂对重组大肠CSN-N胞外分泌的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.5 甘氨酸对重组CSN-N胞外分泌的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.5.1 不同甘氨酸浓度对重组大肠杆菌生长状态的影响 | 第40页 |
| 3.3.5.2 不同甘氨酸浓度对重组大肠杆菌CSN-N胞外分泌的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 发酵罐生产CSN-N高密度发酵研究 | 第41-43页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第43-46页 |
| 4.1 CSN在大肠杆菌中的可溶性分泌表达 | 第43-44页 |
| 4.1.1 pelB信号肽引导CSN在大肠杆菌中分泌表达 | 第43页 |
| 4.1.2 His-tag标签对CSN在大肠杆菌中可溶性表达的影响 | 第43-44页 |
| 4.2 重组大肠杆菌产CSN的发酵优化 | 第44-45页 |
| 4.3 展望 | 第45-46页 |
| 总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 硕士期间发表成果 | 第54页 |
