| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第15-31页 |
| 1.1 GFP类蛋白超家族的系统发生分析 | 第16-17页 |
| 1.2 红色荧光蛋白的研究进展 | 第17-28页 |
| 1.2.1 红色荧光蛋白发色团成熟机制 | 第17-23页 |
| 1.2.1.1 DsRed类红色荧光蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.1.2 黄色、橙色及远红荧光蛋白 | 第19页 |
| 1.2.1.3 长斯托克斯位移红色荧光蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.1.4 光调控红色荧光蛋白 | 第20-21页 |
| 1.2.1.5 Kaede类蛋白家族 | 第21-23页 |
| 1.2.2 近红外荧光蛋白的研究及应用 | 第23-28页 |
| 1.2.2.1 近红外荧光蛋白简介 | 第23-24页 |
| 1.2.2.2 近红外荧光蛋白(细菌光敏色素蛋白)的表型和性质 | 第24-25页 |
| 1.2.2.3 近红外荧光蛋白的应用 | 第25-28页 |
| 1.3 红色荧光蛋白分子进化方法 | 第28-30页 |
| 1.4 本课题研究的目的和内容 | 第30-31页 |
| 第2章 近红外荧光蛋白量子产率提高 | 第31-67页 |
| 2.1 实验设计思路 | 第31-32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-39页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32-39页 |
| 2.2.1.1 质粒与菌株 | 第32-33页 |
| 2.2.1.2 引物 | 第33-37页 |
| 2.2.1.3 试剂和耗材 | 第37页 |
| 2.2.1.4 培养基和主要缓冲液 | 第37-39页 |
| 2.2.2 实验主要仪器 | 第39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-50页 |
| 2.3.1 大肠杆菌质粒提取 | 第39-40页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第40-41页 |
| 2.3.3 近红外荧光蛋白的突变与筛选 | 第41-44页 |
| 2.3.3.1 利用全质粒扩增的定点突变 | 第41-42页 |
| 2.3.3.2 利用重叠延伸PCR的定点突变 | 第42-43页 |
| 2.3.3.3 定点突变的PCR反应体系 | 第43页 |
| 2.3.3.4 荧光蛋白突变体的筛选 | 第43-44页 |
| 2.3.4 近红外荧光蛋白的表达、纯化与浓缩 | 第44-45页 |
| 2.3.5 近红外荧光蛋白纯度分析及浓度测定 | 第45-46页 |
| 2.3.5.1 荧光蛋白纯度分析 | 第45页 |
| 2.3.5.2 蛋白质浓度测定 | 第45-46页 |
| 2.3.6 近红外荧光蛋白光学性质测定 | 第46-48页 |
| 2.3.6.1 光谱扫描 | 第46-47页 |
| 2.3.6.2 荧光蛋白摩尔吸光系数测定 | 第47页 |
| 2.3.6.3 荧光蛋白量子产率测定 | 第47-48页 |
| 2.3.7 细胞生物学实验方法 | 第48-49页 |
| 2.3.7.1 细胞传代培养 | 第48页 |
| 2.3.7.2 细胞的冻存和复苏 | 第48-49页 |
| 2.3.7.3 脂质体转染 | 第49页 |
| 2.3.8 荧光成像和数据分析 | 第49-50页 |
| 2.4 结果和分析 | 第50-64页 |
| 2.4.1 mNeptune684第七β-折叠片的改造 | 第50-52页 |
| 2.4.1.1 二级结构预测及分析 | 第50-51页 |
| 2.4.1.2 荧光蛋白突变体的构建及筛选 | 第51-52页 |
| 2.4.2 近红外荧光蛋白发色团邻近氨基酸的改造 | 第52-64页 |
| 2.4.2.1 发色团邻近氨基酸突变位点的选取 | 第52-53页 |
| 2.4.2.2 荧光蛋白突变体的构建及筛选 | 第53-56页 |
| 2.4.2.3 荧光蛋白突变体的纯化 | 第56-58页 |
| 2.4.2.3.1 SDS-PAGE纯度分析 | 第56-57页 |
| 2.4.2.3.2 Lowry法荧光蛋白浓度测定 | 第57-58页 |
| 2.4.2.4 荧光蛋白光学性质的表征 | 第58-61页 |
| 2.4.2.4.1 mNeptune684及其相关突变体激发和发射光谱测定 | 第58-59页 |
| 2.4.2.4.2 mNeptune684及相关突变体相对量子产率的测定 | 第59-61页 |
| 2.4.2.4.3 mNeptune684_M11V摩尔吸光系数的测定 | 第61页 |
| 2.4.2.5 荧光蛋白细胞内荧光强度测定 | 第61-64页 |
| 2.4.2.5.1 真核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 2.4.2.5.2 荧光蛋白在细胞内的表达及荧光强度分析 | 第63-64页 |
| 2.5 讨论 | 第64-67页 |
| 第3章 近红外荧光蛋白拉曼光谱分析 | 第67-73页 |
| 3.1 拉曼光谱的基本原理介绍 | 第67-68页 |
| 3.2 近红外荧光蛋白mNeptune684与mNeptune的拉曼光谱分析 | 第68-73页 |
| 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
