| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第9页 |
| 1.2 DNA甲基化 | 第9-10页 |
| 1.3 DNA去甲基化 | 第10-12页 |
| 1.4 TET与癌症的关系 | 第12-13页 |
| 1.5 肿瘤中TET的基因突变 | 第13-15页 |
| 第2章 TET1突变体的筛选 | 第15-27页 |
| 2.1 引言 | 第15-16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16页 |
| 2.2.1 仪器设备 | 第16页 |
| 2.2.2 试剂及耗材 | 第16页 |
| 2.3 实验方法 | 第16-19页 |
| 2.3.1 组织内提取DNA | 第16-17页 |
| 2.3.2 Q5高保酶PCR体系： | 第17-18页 |
| 2.3.3 切胶回收目的基因产物 | 第18-19页 |
| 2.4 实验结果 | 第19-25页 |
| 2.4.1 结肠癌组织DNA的提取和TET1编码区扩增引物的设计 | 第19-20页 |
| 2.4.2 TET1编码区的扩增与测序 | 第20-25页 |
| 2.5 讨论 | 第25-27页 |
| 第3章 TET1突变体功能验证 | 第27-49页 |
| 3.1 引言 | 第27-28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.2.1 仪器设备 | 第28页 |
| 3.2.2 试剂及耗材 | 第28-29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-38页 |
| 3.3.1 QuickChange Lightning Site-Directed Mutagenesis Kit进行突变 | 第29-30页 |
| 3.3.2 LB培养基的配制 | 第30页 |
| 3.3.3 大肠杆菌热击转化 | 第30-31页 |
| 3.3.4 无内毒素质粒大提 | 第31-32页 |
| 3.3.5 细胞复苏 | 第32页 |
| 3.3.6 细胞传代 | 第32-33页 |
| 3.3.7 Vigofect 细胞转染 | 第33页 |
| 3.3.8 细胞内内提取DNA | 第33页 |
| 3.3.9 细胞内提取 RNA | 第33-34页 |
| 3.3.10 细胞内提取蛋白 | 第34页 |
| 3.3.11 RNA逆转录 | 第34-35页 |
| 3.3.12 RT-PCR | 第35页 |
| 3.3.13 蛋白定量（BCA法定量） | 第35-36页 |
| 3.3.14 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第36-38页 |
| 3.3.15 DNADotblot | 第38页 |
| 3.4 实验结果 | 第38-48页 |
| 3.4.1 突变型TET1过表达质粒的构建 | 第38-41页 |
| 3.4.2 TET1突变体功能的验证 | 第41-45页 |
| 3.4.3 结肠癌细胞中突变位点的筛选 | 第45-48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59页 |