| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-25页 |
| 1. 手足口病 | 第14-25页 |
| 1.1 手足口病的危害 | 第14页 |
| 1.2 EV71的特性 | 第14-21页 |
| 1.3 酵母表面展示 | 第21-24页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第一部分: 表面展示VP1重组蛋白的酿酒酵母免疫原性研究 | 第25-46页 |
| 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2. 材料 | 第25-31页 |
| 2.1 细胞与病毒株 | 第25页 |
| 2.2 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.3 常用试剂 | 第25-26页 |
| 2.4 缓冲液与培养基 | 第26-30页 |
| 2.5 主要实验仪器和器材 | 第30-31页 |
| 3. 实验方法 | 第31-40页 |
| 3.1 引物合成与载体构建 | 第31-36页 |
| 3.2 EV71 VP1基因在酵母细胞表面的表达和检测 | 第36-40页 |
| 第一部分实验结果 | 第40-46页 |
| 4.1 PCR扩增EV71 VP1基因 | 第40页 |
| 4.2 双酶切VP1基因与载体 | 第40-41页 |
| 4.3 阳性菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 4.4 重组质粒基因测序 | 第42页 |
| 4.5 重组质粒转化酵母细胞及鉴定 | 第42-43页 |
| 4.6 重组酵母的诱导表达及流式检测 | 第43-44页 |
| 4.7 重组酵母的免疫荧光观察 | 第44-45页 |
| 4.8 重组酵母的Western Blot检测 | 第45-46页 |
| 第二部分: 表面展示VP1重组蛋白的酿酒酵母免疫原性研究 | 第46-59页 |
| 材料与方法 | 第46-55页 |
| 5. 材料 | 第46-47页 |
| 5.1 实验动物 | 第46页 |
| 5.2 细胞与病毒株 | 第46页 |
| 5.3 抗体与免疫检测试剂盒 | 第46页 |
| 5.4 主要免疫学试剂 | 第46-47页 |
| 6. EV71 VP1纯化蛋白的准备 | 第47-50页 |
| 6.1 EV71 VP1融合蛋白的原核表达 | 第47-48页 |
| 6.2 VP1蛋白的纯化 | 第48-50页 |
| 7. 动物免疫 | 第50-55页 |
| 7.1 动物分组与免疫计划 | 第50-51页 |
| 7.2 免疫小鼠特异性IgG、IgM抗体的检测 | 第51页 |
| 7.3 血清中和试验分析 | 第51-52页 |
| 7.4 免疫小鼠细胞因子分析 | 第52-54页 |
| 7.5 免疫保护性实验 | 第54页 |
| 7.6 统计学分析 | 第54-55页 |
| 第二部分实验结果 | 第55-59页 |
| 8.1 EV71 VP1蛋白的纯化 | 第55页 |
| 8.2 免疫小鼠血清中特异性IgG、IgM抗体滴度 | 第55-56页 |
| 8.3 免疫小鼠血清中和实验 | 第56-57页 |
| 8.4 免疫小鼠Th1型细胞因子的产量 | 第57-58页 |
| 8.5 母婴传递实验 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
