| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1. 巴马小型猪简介 | 第13-14页 |
| 2. 精原干细胞的研究进展 | 第14-29页 |
| 2.1 精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSC)研究回顾 | 第14-16页 |
| 2.2 精原干细胞分离纯化方法 | 第16-18页 |
| 2.3 精原干细胞体外培养 | 第18-19页 |
| 2.4 精原干细胞特征性分子(biomarker) | 第19-22页 |
| 2.5 精原干细胞分子调控机制的研究进展 | 第22-24页 |
| 2.6 精原干细胞移植 | 第24-25页 |
| 2.7 精原干细胞体外诱导精子 | 第25-27页 |
| 2.8 精原干细胞转基因 | 第27-29页 |
| 3. 巴马小型猪精原干细胞的研究意义 | 第29-32页 |
| 3.1 通过分离培养和体外分化精原干细胞,可以研究精子形成的机理和过程 | 第29页 |
| 3.2 进行品种保护 | 第29-30页 |
| 3.3 生产转基因动物 | 第30页 |
| 3.4 挽救濒危动物 | 第30-31页 |
| 3.5 治疗男性不育 | 第31页 |
| 3.6 诱导精原干细胞分化成其他细胞,为再生性障碍疾病的临床治疗开辟了一条新的途径 | 第31页 |
| 3.7 生产人体可以利用的动物器官 | 第31-32页 |
| 4. 展望 | 第32-33页 |
| 第二章 巴马小型猪睾丸形态学观察和精原干细胞的鉴定 | 第33-46页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| 1. 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1.1 主要试剂 | 第34页 |
| 1.2 试剂的配制 | 第34-36页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 1.4 石蜡切片的制作 | 第36-37页 |
| 1.5 H.E染色(hematoxylin and eosin stain) | 第37-38页 |
| 1.6 巴马小型猪睾丸切片内精原干细胞鉴定 | 第38-39页 |
| 2. 结果与分析 | 第39-43页 |
| 2.1 巴马小型猪睾丸的组织学观察 | 第39-40页 |
| 2.2 巴马小型猪睾丸切片精原干细胞的鉴定 | 第40-43页 |
| 3. 讨论 | 第43-45页 |
| 3.1 巴马小型猪睾丸的组织学观察 | 第43页 |
| 3.2 巴马小型猪睾丸组织内精原干细胞的鉴定 | 第43-45页 |
| 4. 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 巴马小型猪精原干细胞的分离和体外培养 | 第46-58页 |
| 前言 | 第46-47页 |
| 1. 材料和方法 | 第47-50页 |
| 1.1 主要药品 | 第47页 |
| 1.2 主要溶液的准备 | 第47-50页 |
| 1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 2. STO饲养层的制作 | 第50-51页 |
| 2.1 STO饲养层制作条件的探索 | 第50页 |
| 2.2 饲养层细胞的冷冻和复苏 | 第50-51页 |
| 3. 精原干细胞的分离和培养 | 第51-52页 |
| 3.1 精原干细胞的分离 | 第51-52页 |
| 3.2 精原干细胞的体外培养 | 第52页 |
| 4. 实验结果 | 第52-55页 |
| 4.1 饲养层处理条件的探索 | 第52-54页 |
| 4.2 解冻后饲养层细胞的存活情况 | 第54页 |
| 4.3 精原干细胞的分离和体外培养 | 第54-55页 |
| 5. 讨论 | 第55-57页 |
| 6. 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 体外培养的巴马小型猪精原干细胞的鉴定 | 第58-72页 |
| 1. 材料和方法 | 第59-64页 |
| 1.1 主要试剂 | 第59页 |
| 1.2 溶液的配制 | 第59-60页 |
| 1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 1.4 免疫荧光染色 | 第60-61页 |
| 1.4.1 OCT4染色 | 第60-61页 |
| 1.4.2 UCHL1、DBA双染色 | 第61页 |
| 1.4.3 CDH1、DBA双染色 | 第61页 |
| 1.5 RT-PCR | 第61-64页 |
| 1.5.1 总RNA的提取 | 第61-62页 |
| 1.5.2 RNA反转录成cDNA | 第62-63页 |
| 1.5.3 PCR扩增目的基因 | 第63页 |
| 1.5.4 目的片段的鉴定 | 第63-64页 |
| 1.6 精原干细胞的电镜观察 | 第64页 |
| 1.7 体外培养细胞的DNA分析 | 第64页 |
| 2. 实验结果 | 第64-70页 |
| 2.1 克隆的鉴定 | 第65-66页 |
| 2.2 RT-PCR结果 | 第66-67页 |
| 2.3 精原干细胞的电镜观察 | 第67-68页 |
| 2.4 DNA含量的检测 | 第68-69页 |
| 2.5 单倍体细胞的鉴定 | 第69-70页 |
| 3. 讨论 | 第70-71页 |
| 4. 小结 | 第71-72页 |
| 第五章 巴马小型猪精原干细胞转基因条件的初步研究 | 第72-83页 |
| 1. 材料与方法 | 第74-77页 |
| 1.1 主要药品及相关溶液的配制 | 第74页 |
| 1.2 质粒的扩增、提取和鉴定 | 第74-76页 |
| 1.2.1 质粒的小量扩增 | 第74-75页 |
| 1.2.2 质粒的提取 | 第75页 |
| 1.2.3 质粒的鉴定 | 第75页 |
| 1.2.4 质粒的扩增和提取 | 第75-76页 |
| 1.3 脂质体在293T细胞中的表达 | 第76页 |
| 1.4 精原干细胞转基因 | 第76-77页 |
| 1.4.1 脂质体转染法 | 第76-77页 |
| 1.4.2 慢病毒转染 | 第77页 |
| 2. 实验结果 | 第77-81页 |
| 2.1 EGP-N1质粒的鉴定 | 第77-78页 |
| 2.2 EGFP-N1质粒在293T细胞中的表达 | 第78-79页 |
| 2.3 脂质体转染精原干细胞 | 第79页 |
| 2.4 慢病毒转染精原干细胞 | 第79-81页 |
| 3. 讨论 | 第81-82页 |
| 4. 小结 | 第82-83页 |
| 总结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-95页 |
| 缩略词表 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第98页 |
| 攻读博士期间所获得的基金支持 | 第98页 |
