| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 第一部分 研究背景 | 第12-33页 |
| 一、氧化应激 | 第12-17页 |
| （一）ROS与氧化应激 | 第12-13页 |
| （二）ROS的产生及清除 | 第13-15页 |
| （三）氧化应激与疾病 | 第15-17页 |
| 二、Nrf2蛋白在氧化应激中的作用 | 第17-26页 |
| （一）Nrf2蛋白及其结构组成的介绍 | 第17-19页 |
| （二）Nrf2蛋白的生物学功能 | 第19页 |
| （三）Keap1蛋白及Keap1-Nrf2-ARE通路的研究进展 | 第19-25页 |
| （四）Nrf2蛋白的翻译后修饰及其对自身的影响 | 第25-26页 |
| 三、O-GlcNAcylation修饰及其研究进展 | 第26-31页 |
| （一）O-GlcNAcylation修饰的介绍 | 第26-28页 |
| （二）O-GlcNAcylation修饰的作用底物及其功能 | 第28-29页 |
| （三）糖基化与疾病 | 第29-31页 |
| 四、本论文研究内容及意义 | 第31-33页 |
| （一）立题依据 | 第31页 |
| （二）研究内容及意义 | 第31-33页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第33-51页 |
| 一、实验材料 | 第33-35页 |
| （一）实验仪器 | 第33页 |
| （二）试剂 | 第33-34页 |
| （三）抗体 | 第34页 |
| （四）质粒 | 第34-35页 |
| （五）细胞系 | 第35页 |
| 二、实验方法 | 第35-51页 |
| Ⅰ、分子生物学实验方法 | 第35-47页 |
| （一）表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| （二）两步PCR法构建点突变质粒（以pGEX-6P1-Nrf2-T80A为例） | 第36-38页 |
| （三）慢病毒干涉质粒的构建 | 第38页 |
| （四）质粒的提取 | 第38-39页 |
| （五）细胞内总RNA的提取、反转录和荧光定量 PCR（全程 4℃离心，戴口罩和一次性手套） | 第39-41页 |
| （六）蛋白质免疫印迹（Western Blot） | 第41-43页 |
| （七）蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）（全程 4℃离心） | 第43-44页 |
| （八）免疫荧光 | 第44-45页 |
| （九）原核蛋白纯化和 GST pull-down 实验 | 第45-46页 |
| （十）大肠杆菌中质粒的共转化和质谱检测 | 第46-47页 |
| （十一）细胞核蛋白的提取 | 第47页 |
| Ⅱ、细胞生物学实验方法 | 第47-50页 |
| （一）细胞培养 | 第47-48页 |
| （二）HEK293T 中细胞转染（转染试剂为 PEI，以转染 10 cm 细胞板为例） | 第48-49页 |
| （三）慢病毒包装、浓缩和病毒侵染（以10cm培养板为例） | 第49-50页 |
| （四）荧光素酶报告基因检测 | 第50页 |
| Ⅲ、统计分析 | 第50-51页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第51-63页 |
| 一、Hep G2细胞在抗氧化条件下Nrf2蛋白的糖基化水平降低 | 第51-52页 |
| （一）HepG2细胞中抗氧化模型的建立 | 第51页 |
| （二）细胞抗氧化过程中Nrf2蛋白的O-GlcNAc修饰降低 | 第51-52页 |
| 二、Nrf2蛋白能发生糖基化修饰 | 第52-54页 |
| （一）细胞内的Nrf2蛋白能发生糖基化修饰 | 第52-53页 |
| （二）Nrf2在体外被OGT糖基化 | 第53-54页 |
| （三）Nrf2与OGT存在结合 | 第54页 |
| 三、Nrf2蛋白的第80位苏氨酸和第221位苏氨酸能被OGT糖基化 | 第54-57页 |
| （一）质谱实验检测Nrf2蛋白的具体糖基化位点 | 第54-55页 |
| （二）Nrf2的第80位苏氨酸是主要的糖基化位点 | 第55-57页 |
| 四、发生O-GlcNAc修饰的Nrf2蛋白稳定性降低 | 第57-62页 |
| （一）Nrf2的O-GlcNAc修饰降低其蛋白稳定性 | 第57-58页 |
| （二）Nrf2的第80位苏氨酸O-GlcNAc修饰与Keap1的结合能力有关 | 第58-62页 |
| 五、氧化应激刺激下转移入核的Nrf2蛋白稳定性不受O-GlcNAc修饰影响 | 第62-63页 |
| 第四部分 讨论 | 第63-67页 |
| 一、Nrf2的O-GlcNAc修饰与其蛋白稳定性的关系 | 第63-64页 |
| 二、Nrf2蛋白点突变的意义 | 第64-65页 |
| 三、Nrf2蛋白的O-GlcNAc修饰与其他翻译后修饰的相互作用 | 第65页 |
| 四、抗氧化应激反应中Nrf2蛋白O-GlcNAc修饰的调控模型 | 第65-67页 |
| 主要结论和创新点 | 第67-68页 |
| 一、主要结论 | 第67页 |
| 二、创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-86页 |
| 附录 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第89页 |
