| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1.前言 | 第9-18页 |
| 1.1 第二信使的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 第二信使假说 | 第9-10页 |
| 1.1.2 第二信使种类 | 第10页 |
| 1.1.3 第二信使作用机制及生理意义 | 第10-11页 |
| 1.2 c-di-GMP研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 c-di-GMP的发现 | 第11页 |
| 1.2.2 c-di-GMP的生物合成及降解 | 第11-12页 |
| 1.2.3 GGDEF结构域和EAL结构域的特点 | 第12-13页 |
| 1.2.4 c-di-GMP与信号调控 | 第13-14页 |
| 1.3 蓝细菌背景介绍 | 第14-17页 |
| 1.3.1 鱼腥蓝细菌PCC7120简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 蓝细菌的接合转移 | 第15-17页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-23页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.2 培养基配方以及培养条件 | 第18-19页 |
| 2.3 主要的分子生物学试剂 | 第19页 |
| 2.4 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.4.1 鱼腥蓝细菌PCC7120基因组中c-di-GMP相关基因的查找与分析 | 第19页 |
| 2.4.2 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第19-20页 |
| 2.4.3 质粒DNA的其它有关操作 | 第20页 |
| 2.4.4 蓝细菌总DNA的小量抽提 | 第20页 |
| 2.4.5 胞内c-di-GMP的提取 | 第20页 |
| 2.4.6 大肠杆菌转化 | 第20页 |
| 2.4.7 Anabaena PCC 7120通过三亲本杂交进行基因转移 | 第20-21页 |
| 2.4.8 蛋白质的表达和纯化 | 第21-22页 |
| 2.4.9 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-37页 |
| 3.1 鱼腥蓝细菌PCC7120基因组中c-di-GMP相关基因的查找与分析 | 第23-24页 |
| 3.1.1 GGDEF、EAL和HD-GYP结构域 | 第23-24页 |
| 3.1.2 RXXD模体的查找 | 第24页 |
| 3.1.3 与GGDEF、EAL或HD-GYP结构域耦联的其他结构域 | 第24页 |
| 3.2 c-di-GMP相关基因缺失突变体的构建 | 第24-28页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 3.2.2 基因缺失结构的构建 | 第25-26页 |
| 3.2.3 缺失突变体的筛选 | 第26页 |
| 3.2.4 缺失突变体的验证 | 第26-27页 |
| 3.2.5 突变体的表型 | 第27-28页 |
| 3.3 c-di-GMP相关基因在鱼腥蓝细菌PCC7120中的超表达 | 第28-32页 |
| 3.3.1 超表达质粒的构建 | 第28-31页 |
| 3.3.2 超表达菌株构建及验证 | 第31-32页 |
| 3.3.3 超表达菌株表型观察 | 第32页 |
| 3.4 重组蛋白的表达 | 第32-37页 |
| 3.4.1 重组融合质粒的构建 | 第32-34页 |
| 3.4.2 重组蛋白的表达及表型 | 第34-35页 |
| 3.4.3 重组蛋白的纯化 | 第35-37页 |
| 4.小结与讨论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 附录1 鱼腥蓝细菌PCC7120中c-di-GMP相关蛋白的结构域 | 第46-48页 |
| 附录2 本研究所需引物 | 第48-52页 |
| 附录3 质粒及菌株构建完成情况简表 | 第52页 |
