| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略名词对照表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 鸡传染性支气管炎概述 | 第11-12页 |
| 2 鸡传染性支气管炎病毒的病原学研究进展 | 第12-15页 |
| 2.1 生物学分类地位 | 第12页 |
| 2.2 病毒粒子结构 | 第12-13页 |
| 2.3 IBV的基因组结构 | 第13-14页 |
| 2.4 结构蛋白及其生物学功能 | 第14-15页 |
| 3 鸡传染性支气管炎国内外的流行情况 | 第15-17页 |
| 3.1 国外流行情况 | 第15-16页 |
| 3.2 国内流行情况 | 第16-17页 |
| 4 鸡传染性支气管炎病毒ELISA检测方法的研究与应用进展 | 第17-19页 |
| 4.1 IBV ELISA的研究进展 | 第17-18页 |
| 4.2 IBV间接ELSIA的发展 | 第18-19页 |
| 5 IgG及纯化的研究 | 第19-22页 |
| 5.1 抗体的分类及结构 | 第19页 |
| 5.2 抗体分子的功能区 | 第19-20页 |
| 5.3 抗体分子的类型特点 | 第20页 |
| 5.4 IgG的提取与纯化 | 第20-22页 |
| 5.4.1 饱和硫酸铵分步盐析法(AS)和锌酸-硫酸铵法(CA-AS) | 第20-21页 |
| 5.4.2 DEAE-52纤维素离子交换层析纯化IgG | 第21页 |
| 5.4.3 IgG的进一步纯化 | 第21-22页 |
| 6 选题的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 鸡血清IgG的提纯及酶标兔抗鸡IgG的制备 | 第23-35页 |
| 1 材料和方法 | 第23-28页 |
| 1.1 实验动物 | 第23页 |
| 1.2 实验仪器 | 第23页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第24页 |
| 1.5 鸡血清IgG的分离提纯 | 第24-27页 |
| 1.5.1 辛酸-硫酸铵两步法粗提 | 第24页 |
| 1.5.2 DEAE52-纤维素离子交换层析提纯鸡IgG | 第24-25页 |
| 1.5.3 Sephadex G200纯化鸡血清IgG | 第25-26页 |
| 1.5.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度 | 第26-27页 |
| 1.6 兔抗鸡IgG高免血清的制备 | 第27页 |
| 1.7 兔抗鸡IgG的提纯 | 第27页 |
| 1.8 过碘酸钠法标记兔抗鸡IgG | 第27-28页 |
| 1.8.1 HRP的活化 | 第27页 |
| 1.8.2 标记 | 第27页 |
| 1.8.3 稳定化 | 第27页 |
| 1.8.4 提纯 | 第27-28页 |
| 1.8.5 计算酶和IgG的克分子比 | 第28页 |
| 1.8.6 测酶标二抗的工作浓度 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-32页 |
| 2.1 鸡血清IgG纯化结果 | 第28-30页 |
| 2.2 兔抗鸡高免血清效价测定结果 | 第30-31页 |
| 2.3 兔抗鸡IgG纯化结果 | 第31-32页 |
| 2.4 计算酶和IgG的克分子比 | 第32页 |
| 2.5 酶标二抗效价的测定结果 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-35页 |
| 3.1 鸡血清IgG的纯化的研究 | 第32-34页 |
| 3.2 酶标二抗制备的研究 | 第34-35页 |
| 第三章 检测IBV抗体间接ELISA方法的建立 | 第35-58页 |
| 1 材料和方法 | 第35-40页 |
| 1.1 抗原、疫苗、血清 | 第35页 |
| 1.2 实验仪器 | 第35页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第35页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第35页 |
| 1.5 间接ELISA方法的建立及优化 | 第35-37页 |
| 1.5.1 酶标板一致性检测 | 第35-36页 |
| 1.5.2 抗原包被浓度和血清检测浓度的确定 | 第36页 |
| 1.5.3 最佳封闭液和封闭时间的摸索 | 第36页 |
| 1.5.4 血清稀释液的选择 | 第36-37页 |
| 1.5.5 阴阳性血清与包被抗原反应时间的确定 | 第37页 |
| 1.5.6 测定酶标二抗的作用时间 | 第37页 |
| 1.5.7 测定底物显色时间 | 第37页 |
| 1.6 间接ELISA方法阴阳性血清临界值的测定 | 第37-38页 |
| 1.7 与不同毒株的IBV抗血清的反应 | 第38页 |
| 1.8 特异性试验 | 第38页 |
| 1.8.1 阻断实验 | 第38页 |
| 1.8.2 交叉反应试验 | 第38页 |
| 1.9 间接ELISA方法重复性试验 | 第38-39页 |
| 1.10 敏感性试验 | 第39页 |
| 1.11 符合率试验 | 第39页 |
| 1.12 保存试验 | 第39-40页 |
| 1.12.1 板子保存期试验 | 第39页 |
| 1.12.2 酶标兔抗鸡IgG-HRP的保存期 | 第39-40页 |
| 1.12.3 阴、阳对照血清的保存期 | 第40页 |
| 1.12.4 其他试剂保存期 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-55页 |
| 2.1 间接ELISA方法的建立及优化结果 | 第40-48页 |
| 2.1.1 酶标板一致性检测结果 | 第40-41页 |
| 2.1.2 抗原包被浓度和血清检测浓度的确定 | 第41-43页 |
| 2.1.3 适宜封闭液的和封闭时间的确定 | 第43-44页 |
| 2.1.4 血清稀释液的选择 | 第44-45页 |
| 2.1.5 阴阳性血清与包被抗原反应时间的确定 | 第45-46页 |
| 2.1.6 测定酶标二抗的作用时间 | 第46-47页 |
| 2.1.7 测定底物显色时间 | 第47-48页 |
| 2.2 间接ELISA方法阴阳性血清临界值的确定 | 第48页 |
| 2.3 根据摸索出的最佳条件确定间接ELISA的步骤 | 第48-49页 |
| 2.4 与不同毒株的IBV抗血清的反应性 | 第49页 |
| 2.5 特异性试验结果 | 第49-51页 |
| 2.5.1 阻断实验 | 第49-50页 |
| 2.5.2 交叉反应试验 | 第50-51页 |
| 2.6 间接ELISA方法重复性试验 | 第51-52页 |
| 2.7 敏感性试验 | 第52页 |
| 2.8 符合率试验 | 第52-53页 |
| 2.9 试验器材保存期试验 | 第53-55页 |
| 2.9.1 板子保存期试验 | 第53-54页 |
| 2.9.2 酶标兔抗鸡IgG-HRP的保存期 | 第54页 |
| 2.9.3 阴、阳对照血清的保存期 | 第54页 |
| 2.9.4 其他相关试剂的保存期 | 第54-55页 |
| 3. 讨论 | 第55-58页 |
| 3.1 酶标板品质分析 | 第55页 |
| 3.2 血清稀释对OD值的影响 | 第55-56页 |
| 3.3 酶标二抗对试验的影响 | 第56页 |
| 3.4 底物的选择及影响 | 第56页 |
| 3.5 阴性、阳性临界值 | 第56-57页 |
| 3.6 间接ELISA方法的非特异性反应 | 第57页 |
| 3.7 保存期试验 | 第57-58页 |
| 第四章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录一 | 第64-69页 |
| 附录二 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
