| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 WRKY转录因子研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 WRKY转录因子的发现 | 第9页 |
| 1.1.2 WRKY转录因子的结构和分类 | 第9页 |
| 1.1.3 WRKY转录因子的生物功能 | 第9-10页 |
| 1.1.4 橡胶树WRKY转录因子研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 叶片衰老研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 叶片衰老的生理生化指标 | 第11-12页 |
| 1.2.2 激素相关的叶片衰老研究 | 第12页 |
| 1.2.3 胁迫有关的叶片衰老研究 | 第12页 |
| 1.2.4 分子水平上叶片衰老研究 | 第12-13页 |
| 1.3 WRKY是调控叶片衰老的主要转录因子家族 | 第13-14页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第14页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1 植物材料 | 第15页 |
| 2.1.1 橡胶树不同组织和不同时期的叶片的采集 | 第15页 |
| 2.1.2 橡胶树不同处理叶片的采集 | 第15页 |
| 2.2 质粒及菌种 | 第15-16页 |
| 2.2.1 质粒 | 第15页 |
| 2.2.2 菌种 | 第15-16页 |
| 2.3 生化试剂 | 第16页 |
| 2.4 培养基 | 第16页 |
| 2.5 核酸提取 | 第16-18页 |
| 2.5.1 试剂 | 第16-17页 |
| 2.5.2 RNA提取 | 第17-18页 |
| 2.6 半定量分析 | 第18-20页 |
| 2.6.1 材料cDNA的合成 | 第19页 |
| 2.6.2 引物设计 | 第19页 |
| 2.6.3 (标记基因）半定量分析 | 第19-20页 |
| 2.6.4 HbWRKY基因半定量分析 | 第20页 |
| 2.7 目的基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.8 克隆载体构建 | 第21-23页 |
| 2.8.1 目的基因胶回收 | 第21页 |
| 2.8.2 目的基因酶切和连接 | 第21-22页 |
| 2.8.3 目的基因转化大肠杆菌 | 第22页 |
| 2.8.4 重组质粒提取 | 第22-23页 |
| 2.9 基因生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.10 转录因子亚细胞定位检测 | 第23-25页 |
| 2.10.1 融合表达载体构建 | 第23-24页 |
| 2.10.2 农杆菌介导转化烟草 | 第24-25页 |
| 2.10.2.1 农杆菌感受态制备 | 第24页 |
| 2.10.2.2 重组质粒转化农杆菌 | 第24-25页 |
| 2.10.2.3 农杆菌转化烟草叶片 | 第25页 |
| 2.11 利用Real time RT-PCR分析转录因子的表达模式 | 第25-27页 |
| 2.11.1 荧光定量引物设计 | 第25-26页 |
| 2.11.2 荧光定量标准曲线的制作 | 第26页 |
| 2.11.3 荧光定量检测各个基因在不同材料中的表达丰度 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-43页 |
| 3.1 半定量 | 第27-29页 |
| 3.1.1 RNA质量检测 | 第27页 |
| 3.1.2 半定量分析结果 | 第27-29页 |
| 3.2 目的基因克隆 | 第29页 |
| 3.2.1 基因克隆结果 | 第29页 |
| 3.2.2 目的基因载体构建 | 第29页 |
| 3.3 生物信息学分析 | 第29-35页 |
| 3.3.1 一级结构分析及编码蛋白的预测 | 第29-32页 |
| 3.3.2 同源性分析结果 | 第32-34页 |
| 3.3.3 蛋白进化分析 | 第34-35页 |
| 3.3.4 转录因子的亚细胞定位预测结果 | 第35页 |
| 3.4 转录因子亚细胞定位 | 第35-37页 |
| 3.4.1 基因克隆结果 | 第35页 |
| 3.4.2 酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.4.3 菌液PCR鉴定结果 | 第36页 |
| 3.4.4 亚细胞定位结果 | 第36-37页 |
| 3.5 荧光定量分析转录因子的表达模式 | 第37-43页 |
| 3.5.1 不同组织中转录因子的表达模式分析 | 第37-38页 |
| 3.5.2 不同发育时期叶片转录因子的表达模式分析 | 第38页 |
| 3.5.3 不同激素处理下转录因子的表达模式分析 | 第38-40页 |
| 3.5.4 不同胁迫处理下转录因子的表达模式分析 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 缩略词表 | 第52-53页 |
| 硕士期间科研成果简介 | 第53页 |
| 发表论文 | 第53页 |
| 项目来源 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
