| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-19页 |
| 1.1 n-3 多不饱和脂肪酸研究进展 | 第8-12页 |
| 1.1.1 n-3 多不饱和脂肪酸概述 | 第8-9页 |
| 1.1.2 n-3 多不饱和脂肪酸的生理功能 | 第9-11页 |
| 1.1.3 n-3 多不饱和脂肪酸的来源 | 第11-12页 |
| 1.2 裂殖壶菌研究概况 | 第12-15页 |
| 1.2.1 裂殖壶菌概述 | 第12页 |
| 1.2.2 裂殖壶菌DHA合成途径的研究 | 第12-14页 |
| 1.2.3 裂殖壶菌的遗传转化方法研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9简述 | 第15-18页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas系统的发现 | 第15页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas的作用机制与分类 | 第15-17页 |
| 1.3.3 CRISPR技术的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 研究内容及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基和常用溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.5 本研究中所用引物 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 裂殖壶菌的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 基因组DNA的制备 | 第23-25页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 凝胶及PCR产物回收 | 第26-27页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第27页 |
| 2.3 抗生素的筛选 | 第27-28页 |
| 2.4 CRISPR/Cas体系的构建及转化 | 第28-33页 |
| 2.4.1 pCRISPR-Schi载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.4.2 gRNA的设计和寡核苷酸链合成 | 第29页 |
| 2.4.3 pCRISPR-Schi-gRNA载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.4.4 靶向区域上下游同源片段的扩增和连接 | 第30-33页 |
| 2.5 电转化及突变体的鉴定 | 第33-35页 |
| 2.6 生物量和油脂产量分析 | 第35-36页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第36-42页 |
| 3.1 裂殖壶菌抗性验证 | 第36页 |
| 3.2 pCRISPR-Schi-gRNA质粒构建测序结果 | 第36-37页 |
| 3.3 靶向区域上下游同源片段及Zeocin抗性片段的扩增 | 第37-38页 |
| 3.4 电转化结果及菌株鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5 菌株生物量和脂肪酸分析 | 第39-40页 |
| 3.6 讨论 | 第40-42页 |
| 第4章 结论与展望 | 第42-44页 |
| 4.1 结论 | 第42页 |
| 4.2 展望 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
