| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.1 植物油脂 | 第13-14页 |
| 1.1.1 植物油脂简介 | 第13页 |
| 1.1.2 植物油脂合成途径 | 第13-14页 |
| 1.2 植物不饱和脂肪酸合成关键基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 SAD研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.2 FAD研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 新基因功能研究的整体策略 | 第16-18页 |
| 1.3.1 新基因全长cDNA的克隆策略 | 第16页 |
| 1.3.2 通过生物信息学预测新基因的功能 | 第16-17页 |
| 1.3.2.1 编码产物预测分析 | 第17页 |
| 1.3.2.2 序列同源性分析 | 第17页 |
| 1.3.2.3 蛋白质功能域分析 | 第17页 |
| 1.3.3 基因功能的研究方法 | 第17-18页 |
| 1.3.3.1 基因转导 | 第17页 |
| 1.3.3.2 RNA干扰 | 第17-18页 |
| 1.3.3.3 基因敲除 | 第18页 |
| 1.3.3.4 人工染色体的转导 | 第18页 |
| 1.3.4 展望 | 第18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 山核桃不饱和脂肪酸合成SAD基因家族克隆与分析 | 第20-30页 |
| 2 材料和方法 | 第20-29页 |
| 2.1 山核桃SAD家族基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.3 脂肪酸组分测定 | 第21-22页 |
| 2.4 基因表达量分析 | 第22页 |
| 2.5 结果与分析 | 第22-29页 |
| 2.5.1 山核桃SAD家族基因的克隆 | 第22-23页 |
| 2.5.2 山核桃SAD家族基因结构分析 | 第23-24页 |
| 2.5.3 山核桃SAD家族基因编码蛋白理化性质分析及亚细胞定位预测 | 第24-27页 |
| 2.5.4 山核桃SAD家族基因编码蛋白的疏水性分析 | 第27页 |
| 2.5.5 山核桃SAD家族基因编码蛋白三级结构预测（同源建模）分析 | 第27-28页 |
| 2.5.6 山核桃不饱和脂肪酸变化分析 | 第28-29页 |
| 2.5.7 山核桃SAD家族基因的相对表达量 | 第29页 |
| 本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 山核桃不饱和脂肪酸合成FAD基因家族克隆与分析 | 第30-43页 |
| 3 材料和方法 | 第30-40页 |
| 3.1 山核桃FAD家族基因的克隆 | 第30-31页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 3.3 基因表达量分析 | 第32页 |
| 3.4 结果与分析 | 第32-40页 |
| 3.4.1 山核桃FAD家族基因的克隆 | 第32-33页 |
| 3.4.2 山核桃FAD家族基因结构分析 | 第33-34页 |
| 3.4.3 山核桃FAD家族基因编码蛋白理化性质分析及亚细胞定位预测 | 第34-36页 |
| 3.4.4 山核桃FAD家族基因编码蛋白的疏水性分析 | 第36-37页 |
| 3.4.5 山核桃FAD家族基因编码蛋白跨膜结构域分析 | 第37-38页 |
| 3.4.6 山核桃FAD家族基因编码蛋白三级结构预测（同源建模）分析 | 第38-39页 |
| 3.4.7 山核桃FAD家族基因的相对表达量 | 第39-40页 |
| 本章小结 | 第40-43页 |
| 第四章 山核桃油脂合成候选基因功能验证 | 第43-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂及其配制 | 第43-44页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-54页 |
| 4.2.1 油脂合成候选基因生物信息学分析 | 第44页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第44-45页 |
| 4.2.3 山核桃胚的总RNA提取 | 第45-46页 |
| 4.2.4 反转录 | 第46页 |
| 4.2.5 山核桃油脂合成候选基因全长的扩增 | 第46-49页 |
| 4.2.5.1 山核桃油脂合成候选基因的胶回收 | 第47页 |
| 4.2.5.2 候选基因胶回收片段加polyA | 第47页 |
| 4.2.5.3 TA克隆 | 第47-48页 |
| 4.2.5.4 大肠杆菌转化 | 第48页 |
| 4.2.5.5 菌检 | 第48-49页 |
| 4.2.6 植物表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 4.2.6.1 提取中间载体和PC13011载体 | 第49页 |
| 4.2.6.2 质粒的双酶切与目的片段的回收 | 第49页 |
| 4.2.6.3 重组载体的连接及转化 | 第49-50页 |
| 4.2.6.4 电转农杆菌 | 第50-51页 |
| 4.2.7 拟南芥遗传转化及其转基因植株纯合子的筛选 | 第51-52页 |
| 4.2.7.1 拟南芥种植 | 第51页 |
| 4.2.7.2 拟南芥的遗传转化 | 第51页 |
| 4.2.7.3 转基因种子的筛选及种植 | 第51-52页 |
| 4.2.8 转基因植株的筛选及鉴定 | 第52-54页 |
| 4.2.8.1 潮霉素筛选阳性转化株 | 第52页 |
| 4.2.8.2 PCR鉴定阳性转化株 | 第52-53页 |
| 4.2.8.3 GUS染色方法鉴定阳性转化株 | 第53页 |
| 4.2.8.4 拟南芥角果中山核桃油脂合成候选基因表达量 | 第53页 |
| 4.2.8.5 拟南芥种子含油率测定 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 4.3.1 山核桃油脂合成候选基因的克隆 | 第54页 |
| 4.3.2 山核桃油脂合成候选基因生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 4.3.3 山核桃油脂合成候选基因表达分析 | 第56-57页 |
| 4.3.4 山核桃油脂合成候选基因转基因验证 | 第57-60页 |
| 4.3.4.1 Unigene067111转基因功能验证 | 第57-59页 |
| 4.3.4.2 Unigene039858和Unigene066172转基因功能验证 | 第59-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第五章 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
