| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 桔霉素概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 桔霉素理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 桔霉素毒性 | 第12页 |
| 1.1.3 桔霉素限量标准 | 第12-13页 |
| 1.1.4 桔霉素的检测方法 | 第13-16页 |
| 1.2 抗独特型纳米抗体 | 第16-19页 |
| 1.2.1 纳米抗体 | 第17-18页 |
| 1.2.2 抗独特型抗体 | 第18页 |
| 1.2.3 抗独特性纳米抗体应用于毒素免疫学检测 | 第18-19页 |
| 1.3 噬菌体展示技术 | 第19-20页 |
| 1.4 基因工程抗体体外改造策略 | 第20-22页 |
| 1.4.1 随机突变 | 第20-21页 |
| 1.4.2 定向突变 | 第21页 |
| 1.4.3 理性设计 | 第21-22页 |
| 1.5 主要研究内容与意义 | 第22-24页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第22页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第22-24页 |
| 第2章 应用免疫荧光PCR法检测红曲中的桔霉素 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第26-31页 |
| 2.2.1 展示有桔霉素抗独特型纳米抗体的噬菌体扩增及纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.2 噬菌体滴度测定 | 第27页 |
| 2.2.3 普通PCR验证引物正确性 | 第27页 |
| 2.2.4 qPCR扩增噬菌体效率及退火温度的优化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 荧光免疫PCR检测桔霉素方法建立 | 第28-30页 |
| 2.2.6 加标回收实验 | 第30页 |
| 2.2.7 红曲样品中桔霉素含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-40页 |
| 2.3.1 引物正确性的验证 | 第31-32页 |
| 2.3.2 qPCR扩增噬菌体效率及退火温度的优化 | 第32-34页 |
| 2.3.3 荧光免疫PCR检测桔霉素方法建立 | 第34-38页 |
| 2.3.4 样品加标回收实验 | 第38页 |
| 2.3.5 红曲样品中桔霉素含量的测定 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.4.1 基于噬菌体展示的抗独特型抗体免疫荧光PCR方法的建立 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第3章 基于理性设计策略改造CIT模拟抗原 | 第43-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第43-45页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第45-50页 |
| 3.2.1 同源建模及分子对接 | 第45页 |
| 3.2.2 分子对接模型的验证 | 第45-49页 |
| 3.2.3 丙氨酸扫描 | 第49页 |
| 3.2.4 定点饱和突变 | 第49-50页 |
| 3.2.5 标准曲线的建立 | 第50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-65页 |
| 3.3.1 同源建模及分子对接 | 第50-54页 |
| 3.3.2 对接模型的验证 | 第54-56页 |
| 3.3.3 丙氨酸扫描 | 第56-58页 |
| 3.3.4 定点饱和突变 | 第58-63页 |
| 3.3.5 较优突变子与野生型灵敏度的比较 | 第63页 |
| 3.3.6 关于突变子F29V灵敏度提升机制的讨论 | 第63-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-68页 |
| 3.4.1 应用分子模拟技术寻找模拟抗原A9的关键结合位点 | 第65-66页 |
| 3.4.2 定点饱和突变库筛选灵敏度提升突变子 | 第66-67页 |
| 3.4.3 28、29、30 位最优氨基酸随机组合 | 第67-68页 |
| 3.5 小结 | 第68-69页 |
| 第4章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 4.1 结论 | 第69-70页 |
| 4.1.1 首次建立桔霉素定量检测免疫荧光PCR方法 | 第69页 |
| 4.1.2 利用分子模拟及分子对接技术寻找关键位点 | 第69-70页 |
| 4.1.3 灵敏度提升突变子的筛选 | 第70页 |
| 4.2 展望 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第79页 |
